[发明专利]一种兽用狂犬病灭活疫苗的制备方法及该疫苗包含的稳定剂

权利要求书

1.一种兽用狂犬病灭活疫苗的制备方法，包括病毒浓缩流程，其特征在于，所述病毒浓缩流程具体操作为：

（1）使病毒上清液经以0.8~1 L/min流速持续透过300KD膜包，至所述病毒上清液体积浓缩至原体积的1/50~1/40得粗浓缩液；

（2）向步骤（1）所得粗浓缩液中加入10~15倍体积的PBS溶液，在浓缩压力为0.5~1.0bar，流速为1.8~2 L/min的条件下持续透过300KD膜包，体积浓缩至透过前的1/4~2/5时调整流速为0.8~1 L/min，持续浓缩至所述粗浓缩液原体积；步骤（2）重复多次获得病毒浓缩液。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述病毒浓缩流程还包括：对所述病毒上清液进行浓缩之前，使所述病毒上清液在抗原处理罐中以30~55L/min循环2~10min。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，还包括病毒制备流程，具体为：

培养用于狂犬病病毒接种的纯悬浮细胞，接种狂犬病病毒，收获病毒液，将所述病毒液离心过滤后即得病毒上清液。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述纯悬浮细胞为纯悬浮BHK-21细胞。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述过滤操作具体为：

对所述病毒液先采用连续流离心处理，再采用多级微滤处理。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述多级微滤操作为：

将连续流离心后的所述病毒液先用8um低吸附滤膜过滤，再用0.65um或3um+0.8um低吸附滤膜过滤。

7.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述300KD膜包在使用前经过如下处理：

用无菌碱溶液对所述300KD膜包进行灭菌处理，再用注射用水清洗所述300KD膜包直至pH为7.0，然后用无菌PBS溶液平衡所述300KD膜包。

8.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，还包括疫苗制备流程，具体为：

将所述病毒浓缩液灭活纯化，配以稳定剂制成兽用狂犬病疫苗，所述稳定剂由以下成分组成：水解乳蛋白15~30mg/ml，赖氨酸20~60mg/ml，脯氨酸叔丁酯8~25mg/ml和山梨醇12~25mg/ml。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述灭活操作具体为：采用β-丙内酯对所述病毒浓缩液进行灭活，所述β-丙内酯浓度为0.01%-0.03%。

10.权利要求1-9任一项所述的制备方法制备得到的兽用狂犬病灭活疫苗。