[发明专利]用于裂解玉米赤霉烯酮的手段和方法在审
| 申请号： | 201910693874.2 | 申请日： | 2019-07-30 |
| 公开（公告）号： | CN110777128A | 公开（公告）日： | 2020-02-11 |
| 发明（设计）人： | M·萨姆海塞尔;S·弗鲁豪夫;W·D·摩尔;A·霍巴特纳;G·沙特兹迈尔;E·M·宾德;M·阿莱希科;M·费菲尔 | 申请（专利权）人： | 奥地利商艾尔柏有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/14 | 分类号： | C12N9/14;A23K20/189;A23L5/20;A23L29/00;A61K38/46;A61P5/00 |
| 代理公司： | 11382 北京瑞恒信达知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 曹津燕;丁磊 |
| 地址： | 奥地利特*** | 国省代码： | 奥地利;AT |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 水解酶 玉米赤霉烯酮 亲水性 降解 突变 | ||
1.一种用于增加α/β-水解酶的稳定性的方法，所述α/β-水解酶包含对应于SEQ ID NO:1的位置145至218的序列，或包含与对应于SEQ ID NO:1的位置145至218的序列具有58％或更高的序列同一性的序列，所述方法包括：
在以下位置处置换至少一个氨基酸：
-对应于SEQ ID NO:1的位置160至205的位置，或
-对应于SEQ ID NO:2的位置159至204的位置，或
-对应于SEQ ID NO:3、4或5的位置160至205的位置，或
-对应于SEQ ID NO:6的位置176至222的位置，
其中，采用这样的氨基酸置换所述氨基酸：所采用的氨基酸具有比被置换的氨基酸更负的亲水指数，
其中所述亲水指数由Kyte和Doolittle亲水指数确定，
由此获得具有增加的稳定性的α/β-水解酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括在以下位置处置换至少一个氨基酸：
-对应于SEQ ID NO:1的位置185至191的位置，和/或
-对应于SEQ ID NO:2的位置184至190的位置，和/或
-对应于SEQ ID NO:3、4或5的位置185至191的位置，和/或
-对应于SEQ ID NO:6的位置201至208的位置。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中采用选自R、K、N、Q、D、E、H、P、Y、W、S、T、G、A、M、C、F、L或V的氨基酸置换所述氨基酸，优选地，所采用的氨基酸选自R、K、N、Q、D、E、H、P、Y、W、S、T或G，更优选地选自R、K、N、Q、D、E、H或P。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中采用选自R、D、H、G、N或P，优选地选自R、D、H、G或N的氨基酸置换所述氨基酸，更优选地，所采用的氨基酸选自R或N。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述氨基酸置换选自以下的一个或多个：V→A、G→R、G→S、A→P、A→R、A→D、A→H、A→N、A→G、S→D、P→H、M→D、G→E、I→A、I→V、H→N、Q→K、F→Y和/或V→C，优选地，所述氨基酸置换选自以下的一个或多个：V160A、G185R、G185S、A186P、A186R、A188D、A188H、A188N、A188G、A188R、S189D、P190H、M191D、G199E、I200A、I200V、H203N、Q205K、F183Y和/或V197C，更优选地，所述氨基酸置换选自G185R、A186R、A188R、A188D、A188H、A188N和/或M191D。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述增加的稳定性为GRAVY值的降低，pH稳定性的增加和/或温度稳定性的增加。
7.一种通过权利要求4、5或6中任一项所述的方法能够获得的α/β-水解酶。
8.一种具有多肽序列的α/β-水解酶，所述多肽序列包含对应于SEQ ID NO:1的位置145至218的序列，或包含与对应于SEQ ID NO:1的位置145至218的序列具有大于58％的序列同一性的序列，
其中，所述多肽序列包含在以下位置处的至少一个氨基酸置换：
-对应于SEQ ID NO:1的位置160至205的位置，或
-对应于SEQ ID NO:2的位置159至204的位置，或
-对应于SEQ ID NO:3、4或5的位置160至205的位置，或
-对应于SEQ ID NO:6的位置176至222的位置，
其中，所述α/β-水解酶具有的GRAVY值与具有SEQ ID NO:1的多肽序列的α/β-水解酶的GRAVY值相比负至少0.6％。
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