[发明专利]一种3型鸭甲肝病毒突变基因ISA-A117C-C4334A及构建方法有效
申请号: | 201910551095.9 | 申请日: | 2019-08-21 |
公开(公告)号: | CN110295180B | 公开(公告)日: | 2022-10-18 |
发明(设计)人: | 程安春;文兴建;汪铭书 | 申请(专利权)人: | 四川农业大学 |
主分类号: | C12N15/51 | 分类号: | C12N15/51;C12N15/86;A61K39/29;A61P31/14 |
代理公司: | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人: | 张鹏 |
地址: | 611130 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 甲肝 病毒 突变 基因 isa a117c c4334a 构建 方法 | ||
1.一种3型鸭甲肝病毒突变基因ISA-A117C-C4334A,其特征在于,所述的突变基因ISA-A117C-C4334A是分别以3型鸭甲肝病毒强毒株的基因组反转录产物和真核表达质粒pEGFP-C1为模板,采用如下表所示的引物进行扩增并融合所得,所述的3型鸭甲肝病毒强毒株保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:V201305;
其中,以所述的基因组反转录产物为模板,使用引物F1-F和A117C-R、A117C-F和F1-R分别扩增得到DHAV-3-F1-A117C-F和DHAV-3-F1-A117C-R片段,使用引物F2-1-F和F2-1-R、F2-2-F和C4334A-R、C4334A-F和F2-2-R分别扩增得到DHAV-3-F2-1片段、DHAV-3-F2-C4334A-1片段和DHAV-3-F2-C4334A-2片段,使用引物F3-HDVR-F和F3-HDVR-R扩增得到DHAV-3-F3-HDVR片段;以所述的真核表达质粒pEGFP-C1为模板,使用引物pCMV-F和pCMV-R扩增得到pCMV片段,使用引物HDVR-SV40pA-F和HDVR-SV40pA-R扩增得到HDVR-SV40pA片段;再通过融合PCR技术,将DHAV-3-F1-A117C-F和DHAV-3-F1-A117C-R片段融合为片段F1-A117C,将pCMV和F1-A117C片段融合为片段pCMV-F1;将DHAV-3-F2-1片段、DHAV-3-F2-C4334A-1片段和DHAV-3-F2-C4334A-2片段融合为片段F2;将DHAV-3-F3-HDVR和HDVR-SV40pA片段融合为片段F3-HdvRz/SV40pA,将获得的片段pCMV-F1、片段F2和片段F3-HdvRz/SV40pA依次连接构成所述的突变基因ISA-A117C-C4334A。
2.权利要求1所述的3型鸭甲肝病毒突变基因ISA-A117C-C4334A在制备3型鸭肝炎病毒疫苗中的应用。
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- 2008-04-28 - 2013-01-23 - C12N15/51
- 本发明提供丙型肝炎病毒基因、来自该基因的复制子RNA、导入了复制子RNA的复制子复制细胞、以及使用了该复制子复制细胞的药物的筛选方法。通过将含有下述(A)、(B)、(C)、(D)或(E)的多核苷酸的复制子RNA、或含有编码丙型肝炎病毒的多蛋白氨基酸序列中第1804位的亮氨酸和第1966位的赖氨酸的核苷酸以及编码NS4B蛋白的多核苷酸的基因型1b的复制子RNA导入细胞中,可以制作复制子复制细胞,利用该复制子复制细胞可以进行药物的筛选。所述(A)~(E)的多核苷酸为:(A)包含SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列的多核苷酸;(B)包含SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列的多核苷酸;(C)编码包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的多肽的多核苷酸;(D)编码包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的多肽的多核苷酸;(E)包含与SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列的同源性为90%以上的核苷酸序列的多核苷酸。
- 感染性丙型肝炎病毒高生产HCV突变体及其应用-201010139886.X
- 北村义浩;清水洋子;青木千惠;于立娟;胁田隆字 - 国立大学法人东京大学;学校法人日本大学;中国科学院微生物研究所;国立感染症研究所长;财团法人东京都医学研究机构;东丽株式会社
- 2010-03-25 - 2011-09-28 - C12N15/51
- 本发明的目的在于提供在细胞培养系统中显示出病毒高生产能的HCV株。本发明提供核酸,该核酸编码包含1个以上氨基酸取代的丙型肝炎病毒JFH1株的前体多聚蛋白,当以序列表的SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列为基准时,上述前体多聚蛋白中至少第862位的谷氨酰胺被取代成精氨酸。
- 丙型肝炎病毒疫苗-200910251298.2
- E·A·埃米尼;D·C·卡斯罗;A·J·贝特;J·W·施弗;A·尼科西亚;A·拉姆;A·卢扎戈;R·科尔特斯;S·科罗卡 - 默沙东公司;P.安杰莱蒂分子生物学研究所
- 2002-10-10 - 2011-03-23 - C12N15/51
- 丙型肝炎病毒疫苗,本发明涉及Ad6载体和编码含有失活的NS5B RNA-依赖型RNA聚合酶区的Met-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B多肽的核酸。所述核酸特别适合用作提供多种抗原的腺病毒载体或DNA质粒疫苗的成分它,用于产生针对HCV的HCV特异性细胞介导的免疫(CMI)反应。
- 甲型肝炎病毒基因组全序列-200910050474.6
- 张爱晖;施松明;周平华;吴克 - 上海泽润生物科技有限公司
- 2009-04-30 - 2010-11-03 - C12N15/51
- 本发明涉及甲型肝炎病毒基因组全序列。更具体地,本发明涉及全序列如SEQ ID NO:1所示的甲型肝炎病毒的基因组序列及其应用。本发明还提供了甲型肝炎病毒特异性的引物和探针。
- 专利分类