[发明专利]一种痕量cfDNA提取对接高通量测序文库的优化方法

权利要求书

1.一种痕量cfDNA提取对接高通量测序文库的优化方法，主要特征在于，溶液收集后加入等体积的酚氯仿，再加入100ng carrier DNA混合，并制备高效液相分离管，将消化后的液体转移到高效液相分离管，高速离心进行液相分层，可回收98％以上的DNA溶液量。

2.根据权利1所述的进一步的一种痕量cfDNA提取对接高通量测序文库的优化方法，主要特征在于，所述方法优化步骤包括如下：

(1).取200ul的血浆/血清样品到1.5ml的离心管中；

(2).加入10μl的蛋白酶k工作液(20mg/ml),再加入20ul的裂解液；

(3).涡旋震荡10sec混匀后，放入预热至50-60℃的恒温中过夜；

(4).溶液收集后加入等体积的酚氯仿，再加入100ng carrier DNA混合；

(5)制备高效液相分离管；

(6).将消化后的液体转移到高效液相分离管，高速离心进行液相分层，可回收98％以上的DNA溶液量；

(7).加入1.3ml体积的无水乙醇，100ul3M醋酸钠PH5.2，最大转速4°离心60sec，弃上清；

(8).再加75％-80％酒精洗涤一次最大转速4°离心60sec，弃上清。重复该步骤一次；

(9).晾干后水溶解；

(10).进入常规高通量测序文库构建。

3.根据权利1所述的进一步的一种痕量cfDNA提取对接高通量测序文库的优化方法，主要特征在于，进一步的，所述步骤(3)中恒温方式为金属浴，水浴，沙浴。

4.根据权利1所述的进一步的一种痕量cfDNA提取对接高通量测序文库的优化方法，主要特征在于，所述步骤(4)中加入100ng carrier DNA混合，carrier DNA为提取的高纯度的线粒体DNA，用于提高溶液复杂度，提高cfDNA得率。

5.根据权利1所述的进一步的一种痕量cfDNA提取对接高通量测序文库的优化方法，主要特征在于，所述步骤(5)制备高效液相分离管主要制备流程如下：

(a)向2ml离心管中加入聚二甲基硅氧烷(终浓度10-50％)+SiO2溶液(终浓度1-10％)+200-300ul真空硅脂；

(b)混合均匀；

(c)并快速高速离心30秒。

6.根据权利1所述的进一步的一种痕量cfDNA提取对接高通量测序文库的优化方法，主要特征在于，所述聚二甲基硅氧烷+SiO2溶液终浓度分别为10-50％和1-10％。