[发明专利]一种CAR-T细胞及其应用

说明书

本发明涉及一种CAR‑T细胞及应用，CAR分子包括依次串联的引导序列、胞外识别区、铰链区、跨膜区和胞内刺激信号区，所述的胞外识别区为uPA的A链上的CD87结合位点，本发明可应用于治疗CD87阳性恶性肿瘤，特别是在治疗卵巢癌中的应用效果显著，其创新在于利用CD87作为抗癌靶点，并且CAR‑T胞外识别区是利用能够与CD87结合的uPA的A链上的若干连续的氨基酸作为替代常规的单链抗体部分，弥补设计CAR‑T时选择单链抗体的局限性和CAR‑T治疗卵巢癌及CD87相关肿瘤从抗原选择、T细胞修饰等环节的多项空白，值得进一步研究和推广。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种CAR-T细胞及其应用。

背景技术

基于嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,以下简称CAR）的T细胞治疗是目前治疗血液系统肿瘤中取得突破性进展的治疗方法之一，抗CD19的CAR-T细胞治疗方法已经获得了美国FDA的批准用于临床CD19+的白血病的治疗，在国内的多家研究机构及医疗机构也相继展开了这一领域的研究。相比于CAR-T细胞治疗方法在血液肿瘤中取得的明显效果，该方法对于实体瘤的治疗效果相对较差，也是目前CAR-T细胞治疗的主要研究热点和难点。

卵巢癌在女性生殖系统恶性肿瘤中，发病率低于宫颈癌和子宫内膜癌，居于第3位，但是死亡率居于第1位。目前针对卵巢癌的治疗以手术及化疗为主，尽管手术技能与化疗方案不断改进，但晚期卵巢癌的五年生存率仍约为30-40%。同时卵巢癌的发病隐匿，发生转移较早，大部分患者就诊时已经达到III期或IV期。并且卵巢癌复发率较高，大约70-80%的卵巢癌患者都会复发。在我国和世界范围内，不论城市和乡村，卵巢癌导致的女性死亡比例均位于各肿瘤类型的前10位，现今卵巢癌的发生发展，严重威胁着广大女性的健康。尽管针对卵巢癌的各种新药物、新方法层出不穷，但是切实有效的仍然不多，借鉴CAR-T细胞治疗方法在血液系统肿瘤中取得的巨大进展，CAR-T治疗卵巢癌的研究方向有望带来革命性的突破。卵巢癌作为实体瘤中恶性度较高的肿瘤类型，研究如何使CAR-T攻克卵巢癌，也将会给CAR-T治疗实体瘤领域带来新的解决办法。CAR-T细胞治疗方法的基本策略是通过修饰T细胞并利用T细胞对肿瘤细胞的杀伤能力来治疗肿瘤。CAR-T的代数分类是依据修饰T细胞所用的过表达片段而分类的。

基本的CAR-T具有胞外识别区、跨膜区和胞内信号区。胞外识别区多数是由识别肿瘤相关抗原的单链抗体构成的，针对于肿瘤组织的特异性抗原进行识别，这种识别使得T细胞发挥杀伤作用具有特异性。跨膜区是连接胞外识别区和胞内信号区的部分。胞内信号区是刺激激活T细胞功能的关键部分。CAR-T的代数分类也主要依据胞内信号区的区别而定。第一代CAR-T的胞内信号区只含有CD3ζ，在此基础上添加了1个共刺激分子例如4-1BB或者CD28即为第二代CAR-T，进一步若添加2个共刺激分子即为第三代CAR-T，现有的CAR-T的绝大部分临床应用使用的都是第三代CAR-T的设计思路。

目前最新的研究也有第四代CAR-T的报道，在修饰T细胞的片段上添加细胞因子分泌功能可以使得T细胞除了具备杀伤作用还具备明显的细胞因子分泌能力。在构建CAR-T时，对于T细胞修饰的复杂程度和CAR-T实际应用中发挥功能需要一个平衡，据目前的临床资料显示，第三代CAR-T具有较稳定和较高效的作用。目前针对于卵巢癌的CAR-T治疗有许多的临床前研究和临床试验。第一个CAR-T的研究就是以卵巢癌为研究对象的，目前主要涉及的抗肿瘤靶点有间皮素、叶酸受体α、Her-2等。之所以CAR-T攻克实体瘤效果逊于血液系统肿瘤的原因涉及到很多实体瘤的固有特征。例如，实体肿瘤的微环境中存在免疫抑制成分，使得T细胞进入肿瘤微环境后杀伤能力被抑制同时也无法持续性发挥作用。又比如实体瘤组织成分较为复杂，在肿瘤发生发展过程中，出现了抗原逃逸现象，造成CAR-T的靶向能力减弱。其中一个关键的原因是，实体肿瘤组织不同于血液肿瘤以单个肿瘤细胞循环于血液系统内，而是以肿瘤组织团块的形式存在，具有肿瘤实质成分和肿瘤间质成分，细胞和细胞间质之间结合紧密，具备阻挡抗肿瘤成分的天然物理屏障，这也是影响CAR-T渗透进肿瘤组织的关键。