[发明专利]源自Nocardia farcinica的L-泛解酸内酯脱氢酶及其应用有效
| 申请号： | 201910366852.5 | 申请日： | 2019-05-05 |
| 公开（公告）号： | CN110527671B | 公开（公告）日： | 2021-03-23 |
| 发明（设计）人： | 应向贤;汪钊;赵嫚;程先锋;林行;殷杭华;张连春;毛王伟;陈梁;白彦兵;金文究;沈汉军;汪军;蔡剑敏 | 申请（专利权）人： | 杭州鑫富科技有限公司;浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 潘颖;赵青朵 |
| 地址： | 311300 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 源自 nocardia farcinica 泛解酸 内酯 脱氢酶 及其 应用 | ||
1.L-泛解酸内酯脱氢酶在催化L-泛解酸内酯生成D-泛解酸内酯中的应用，其特征在于，所述L-泛解酸内酯脱氢酶来源于
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，编码权利要求1所述L-泛解酸内酯脱氢酶的多核苷酸的核苷酸序列为SEQ ID No:1所示的核苷酸序列。
3.一种多酶重组细胞，其特征在于，所述多酶重组细胞诱导产生权利要求1所述L-泛解酸内酯脱氢酶和D-酮基泛解酸内酯还原酶；
所述L-泛解酸内酯脱氢酶来源于
所述D-酮基泛解酸内酯还原酶来源于酿酒酵母，其氨基酸序列如SEQ ID No:4所示；
所述重组细胞为非植物品种。
4.如权利要求3所述的多酶重组细胞，其特征在于，编码所述D-酮基泛解酸内酯还原酶的多核苷酸序列为SEQ ID No:3所示的核苷酸序列。
5.如权利要求3所述的多酶重组细胞，其特征在于，所述多酶重组细胞还诱导产生葡萄糖脱氢酶。
6.如权利要求5所述的多酶重组细胞，其特征在于，所述葡萄糖脱氢酶来源于微小杆菌，其氨基酸序列如SEQ ID No:6所示。
7.如权利要求6所述的多酶重组细胞，其特征在于，编码所述葡萄糖脱氢酶的多核苷酸序列为SEQ ID No:5所示的核苷酸序列。
8.多酶重组细胞的构建方法，其特征在于，包括：
步骤一，将权利要求2所述的多核苷酸插入第一载体，得到第一重组载体；将权利要求4所述的多核苷酸插入第二载体，得到第二重组载体；以及
步骤二，将所述第一重组载体和第二重组载体导入宿主细胞，得到多酶重组细胞。
9.如权利要求8所述的构建方法，其特征在于，所述步骤一中，将权利要求4和权利要求7中所述的多核苷酸分别插入第二载体，得到第二重组载体。
10.如权利要求8或9所述的构建方法，其特征在于，所述第一载体为pET-28b，所述第二载体为pACYCDuet-1，所述宿主细胞为
11.一种制备D-泛解酸内酯的方法，其特征在于，利用多酶重组细胞诱导产生的L-泛解酸内酯脱氢酶和D-酮基泛解酸内酯还原酶催化L-泛解酸内酯生成D-泛解酸内酯；
所述L-泛解酸内酯脱氢酶来源于
所述D-酮基泛解酸内酯还原酶来源于酿酒酵母，其氨基酸序列如SEQ ID No:4所示。
12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述多酶重组细胞还诱导产生葡萄糖脱氢酶，以葡萄糖作为辅底物，利用所述葡萄糖脱氢酶连续催化反应体系中的NADP+转化为NADPH。
13.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：从反应后的反应体系中分离出D-泛解酸内酯。
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