[发明专利]一种PS转座子系统及其介导的基因转移方法

权利要求书

1.一种PS转座子系统，其特征在于，包括可插入目的基因盒的两个末端重复序列的转基因供体质粒和提供转座活性的转座酶辅助质粒；目的基因盒为报告基因表达盒或其它外源基因表达盒，或者基因捕获元件；两个末端重复序列分别如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示；转座酶辅助质粒中含有PS CDS，PS CDS为1275bp的转座酶序列，编码425个氨基酸，转座酶序列如SEQ ID No.5所示。

2.根据权利要求1所述的PS转座子系统，其特征在于，所述的转基因供体质粒包括：PS转座子末端重复序列、目的基因表达盒；所述的转座酶辅助质粒为转座酶真核表达质粒pcDNA3.9-PSase，转座酶辅助质粒亦可作为体外转录载体；所述的转基因供体质粒序列如SEQ ID No.1所示；pcDNA3.9-PSase的序列如SEQ ID No.4所示。

3.根据权利要求1所述的PS转座子系统，其特征在于，所述转基因供体质粒的两个末端重复序列为对Tc1/Mariner超家族中PS转座子家族进行分子重构所得。

4.根据权利要求1所述的PS转座子系统，其特征在于，所述转座酶序列为对Tc1/Mariner超家族中PS转座子家族进行分子重构获得；转座酶真核表达质粒pcDNA3.9-PSase的构建步骤为：将PS转座酶DNA序列与pcDNA3.9载体连接，构建表达转座酶的辅助质粒，因pcDNA3.9上含有T7启动子和T7转录终止序列，故转座酶辅助质粒还可作为体外转录转座酶辅助质粒；所述转座酶辅助质粒序列如SEQ ID No.4所示。

5.根据权利要求4所述的PS转座子系统，其特征在于，体外转录转座酶辅助质粒pcDNA3.9-PSase载体能够利用 mMessagemMachine T7 kit试剂盒进行PS转座酶5’加帽mRNA的体外转录。

6.一种基于PS转座子系统的基因转移方法，其特征在于，是通过权利要求1-5任意一项所述的PS转座子系统按照基因克隆的方式将目的基因导入受体基因组，所述PS转座子系统包括：可插入目的基因盒的两个末端重复序列的转基因供体质粒和提供转座活性的转座酶辅助质粒。

7.一种如权利要求1-5任意一项所述的PS转座子系统的制备方法，其特征在于，(1)转基因供体质粒的构建：运用PCR技术分别克隆目的基因表达盒所需元件；构建目的基因表达盒；通过基因克隆技术将所述目的基因表达盒克隆入PS转座子的PS5’TIR和PS3’TIR之间，构建转基因供体质粒；(2) 转基因辅助质粒的构建：化学合成转座酶序列Psase CDS，使PSase CDS与pcDNA3.9载体连接，构建能表达或者体外转录转座酶的辅助质粒；PSase CDS为PS CDS。