[发明专利]一种快速鉴定罂粟的SSR试剂盒

权利要求书

1.一种快速鉴定罂粟的SSR试剂盒，包括一套用于检测罂粟及其近缘物种的分子标记；

其特征在于：

所述的一套用于检测罂粟及其近缘物种的分子标记，包括M13公共荧光引物及3个特异性引物对，其引物序列为：

M13：GTAAAACGACGGCCAGT；

P1F：GTAAAACGACGGCCAGTTGGTATCGATCCTTGAAGCC；

P1R：CTCTGCACGATGAAGCTGAC；

P2F：GTAAAACGACGGCCAGTCCTTCGACTAAGGTTCACGC；

P2R：AATCCTCGGCTGAGCTTACA；

P3F：GTAAAACGACGGCCAGTAAAGGGAAAGAAGCTCCGTC；

P3R：CAGGACCTCTCCTTGCAAAA；

区分罂粟及其近缘物种的特异性片段组合分别为：

组合一，包括片段大小为166-168bp、256-258bp和318-320bp的片段；

组合二，包括片段大小为166-168bp、256-258bp和321-323bp的片段；

所述引物分装于试剂盒中，引物对中的引物F与R按摩尔比1：20混合；所述引物F指引物P1F、P2F及P3F；所述引物R指引物P1R、P2R及P3R；所述引物对指P1F与P1R，P2F与P2R，P3F与P3R；所述引物对中的引物对P1、引物对P2和引物对P3按摩尔比2：2：3混合；所述引物对P1包含引物P1F与P1R，引物对P2包含引物P2F与P2R，引物对P3包含引物P3F与P3R；M13公共荧光引物与三个引物对中R引物含量总和的摩尔比为3：5；

所述引物中引物M13标记荧光基团。

2.基于权利要求1所述一种快速鉴定罂粟的SSR试剂盒对罂粟的鉴定方法，其特征在于：

利用所述的3个引物对及M13公共荧光引物，使用Touchdown程序：94℃变性30s，65℃退火30s，72℃延伸30s，进行15个循环，每个循环退火温度降低1℃；94℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸30s，进行18个循环，72℃延伸10min；对样本DNA进行PCR扩增，按照下列不同长度的特异性片段组合进行罂粟物种的鉴定，罂粟的不同特异性片段组合分别为：

组合一，包含片段大小为166-168bp、256-258bp和318-320bp的片段；

组合二，包括片段大小为166-168bp、256-258bp和321-323bp的片段；

如果与上述所列任一组合片段相符，则待测样本为罂粟；

如果与上述所列组合均不相符，则待测样本不是罂粟。