[发明专利]非洲猪瘟病毒化学发光试剂盒

说明书

本发明涉及免疫检测技术领域，公开了一种非洲猪瘟病毒化学发光试剂盒，包括微流控芯片、稀释液、10×洗涤液、酶标抗体、化学发光底物、阳性对照血清以及阴性对照血清，微流控芯片包括依次连通的进样区、样本处理区、检测区和出样区；进样区上设有定量环，进样区通过定量环与样本处理区连通；检测区包括阳性对照区、空白对照区和反应区；微流控芯片还包括缓冲溶液池和洗涤液池以及加药池，缓冲溶液池和洗涤液池分别与样本处理区连通，加药池与检测池连通。本发明将微流控芯片用于检测非洲猪瘟病毒，操作简单、检测快速、成本低廉的优点，而且，本发明得到的试剂盒的灵敏度高，特异性强，亲和力高，不会与其它传播病毒发生血清交叉学反应。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，尤其涉及了一种非洲猪瘟病毒化学发光试剂盒。

背景技术

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪和各种野猪(如非洲野猪、欧洲野猪等)引起一种急性、出血性、烈性传染病。其特征是发病过程短，最急性和急性感染死亡率高达100％，临床表现为发热(达40～42℃)，心跳加快，呼吸困难，部分咳嗽，眼、鼻有浆液性或粘液性脓性分泌物，皮肤发绀，淋巴结、肾、胃肠粘膜明显出血。

我国是养猪及猪肉消费大国，生猪出栏量、存栏量以及猪肉消费量均位于全球首位，每年种猪及猪肉制品进口总量巨大，与多个国家贸易频繁；而且，我国与其它国家的旅客往来频繁，旅客携带的商品数量多、种类杂。因此，非洲猪瘟传入我国的风险日益加大，一旦传入，其带来的直接以及间接损失将不可估量。

病毒性动物疫病预防与控制的关键是快速检测疫病病毒。现有非洲猪瘟病毒的检测方法主要包括病毒分离法、反转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)和胶体金免疫层析试纸条。病毒分离法是目前诊断和鉴定的金标准方法，灵敏度高，但检测时间太长，需要7～10天；RT-PCR是世界卫生组织推荐的检测方法，需要3～6小时，灵敏度较高，但需要复杂的样本前处理；试纸条检测时间短，通常在15分钟内，但灵敏度偏低，假阳性率偏高。现有非洲猪瘟病毒检测方法存在时间过长、操作复杂或准确性低的不足，这在一定程度上限制了基层动物疫病防控机构开展动物疫病快速筛查工作。

目前，专利申请号为201310193976.0的发明专利公开了一种检测非洲猪瘟病毒抗体的多抗原ELISA试剂盒，试剂盒中有抗原包被的酶标板、酶标二抗、阳性对照血清、阴性对照血清、稀释液、10×洗涤液、OPD与过氧化脲片剂、终止液，该专利将三种重组抗原以最佳比例混合，建立的检测ASFV抗体的多抗原ELISA(MA-ELISA)试剂盒，其特异性显著高于OIE推荐ELISA和进口同类试剂盒，而且扩大了毒株检测范围。但微流控芯片作为近几年新发展的一种技术，其尺寸小、比表面积大和成本较低，因此具有样本消耗少和反应速度快的优势，将其应用于非洲猪瘟病毒检测，可以使检测速度更快，成本更低。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的上述缺点，提供了一种非洲猪瘟病毒化学发光试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：

非洲猪瘟病毒化学发光试剂盒，包括微流控芯片、稀释液、10×洗涤液、酶标抗体、化学发光底物、阳性对照血清以及阴性对照血清，微流控芯片包括依次连通的进样区、样本处理区、检测区和出样区；进样区上设有定量环，进样区通过定量环与样本处理区连通；检测区包括阳性对照区、阴性对照区、空白对照区和反应区，阳性对照区内包被有鼠抗猪IgG抗体，空白对照区内包被有pH＝7.8的PBS缓冲液，阴性对照区内包被有非洲猪瘟病毒重组抗原，反应区内包被有非洲猪瘟病毒重组抗原，样本处理区分别与阳性对照区、阴性对照区、空白对照区和反应区连通，样本处理区与出样区连通，出样区上设有排空阀；微流控芯片还包括缓冲溶液池和洗涤液池以及加药池，缓冲溶液池内设有用于处理样本的稀释液，洗涤液池内设有用于处理样本的10×洗涤液，缓冲溶液池和洗涤液池分别与样本处理区连通，加药池与检测区连通；阳性对照血清为重组蛋白VP73和p54分别免疫猪获得的血清，阴性对照血清为非免疫健康猪血清，酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的鼠抗猪IgG抗体，化学发光底物为鲁米诺。