[发明专利]一种黄秋葵内参基因TUA及其应用

说明书

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种黄秋葵内参基因TUA及其应用。本发明公开了一个用于黄秋葵内参基因的α微管蛋白基因（TUA）序列，在此基础上设计定量特异引物，α微管蛋白基因（TUA）基因在黄秋葵高温和干旱胁迫下均能稳定表达，适合在黄秋葵基因在高温和干旱胁迫下表达研究中作为内参基因。本发明首次将α微管蛋白基因（TUA）作为内参基因用于黄秋葵基因高温和干旱胁迫表达分析，有利于提高黄秋葵基因表达分析研究的稳定性、可靠性和重复性；本发明提出的检测引物具有特异性，大大的提高了检测效率，提高了检测结果的可信度。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种黄秋葵内参基因α微管蛋白基因（TUA）及其应用，具体地，利用该黄秋葵内参基因的核苷酸序列为基础设计一对荧光定量特异引物。

背景技术

黄秋葵（Hibiscus esculentus L.），秋葵属，原产于非洲东北部，世界栽培广泛，近年来，国内引进推广较快，栽培面积逐年增长。黄秋葵以食嫩果为主，含丰富蛋白质、维生素及矿物盐、糖聚合体等营养成分，是一种具有较高营养价值、保健功能的健康蔬菜。随着其分子生物学研究的不断深入和发展，基因表达分析正逐渐应用于揭示黄秋葵基因调控机理的研究中。在基因表达分析时，为了消除不同组织细胞间初始模板量、RNA质量、酶促反应效率等的偏差，往往需要引入内参基因对其进行校正。理想的内参基因应该在不同组织类型、生长阶段及不同实验条件下表达水平均保持一致，实际研究中常选择稳定表达的看家基因，如肌动蛋白基因(actin)、甘油醛-3-磷酸-脱氢酶基因(GAPDH)、α微管和β微管蛋白基因((TUA、TUB))、泛素基因(ubiquitin)、18S核糖体RNA(18S rRNA)等作为内参基因。

微管蛋白(tubulin)是细胞的一种骨架蛋白，参与细胞内胞质环流、形状维持、运动、分裂、分化、物质运输、信号转导以及极性建成等重要的生理活动，可以分为α、β、γ、δ、ε等多种亚家族，其中仅α-tubulin蛋白和β-tubulin蛋白组成一种异源二聚体蛋白，其基因通常呈现组成型表达；因此很多物种 将其作为研究基因差异表达的内参基因。在对大豆(Glycine max L.)和桃(Amygdalus persica)的研究中发现，TUA的表达稳定性也普遍高于TUB。但目前关于黄秋葵TUA基因的克隆和作为黄秋葵内参基因的研究还未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种黄秋葵内参基因α微管蛋白基因（TUA），并揭露了利用该黄秋葵内参基因为基础设计的实时荧光定量PCR引物。

本发明通过以下技术方案解决上述技术问题：

一种黄秋葵内参基因α微管蛋白基因（TUA），所述内参基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示；且该内参基因是以黄秋葵DNA为模板、并以如下引物对进行PCR扩增反应所得的；

其中引物对为：

正向引物5'- CTTAAACGAATATGAGAGAGTGC -3'，

反向引物5'- AGCCCTCACGAGCATTTGGTTCA -3'。

进一步地，以所述内参基因的核苷酸序列为基础，利用Primer Premier5.0 软件、并遵循实时荧光定量PCR引物设计的原则设计出一对荧光定量特异引物，该对荧光定量特异引物即为所述实时荧光定量PCR引物；

且该实时荧光定量PCR引物为：

正向引物5'- GTTGCCGAAGTATTCTCCC -3'，

反向引物5'- CTCCTCGTTGTCATCCTCATC -3'。

本发明的有益效果在于：