[发明专利]一种生物制剂中宿主残留rDNA的去除方法在审
| 申请号： | 201910341738.7 | 申请日： | 2019-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN111849962A | 公开（公告）日： | 2020-10-30 |
| 发明（设计）人： | 杨宏宇;王海燕;张广民;蔡辉益 | 申请（专利权）人： | 北京挑战农业科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京华仁联合知识产权代理有限公司 11588 | 代理人： | 苏雪雪 |
| 地址： | 100081 北京市海淀区中关*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生物制剂 宿主 残留 rdna 去除 方法 | ||
1.一种基因工程菌生产的生物制品中rDNA去除方法，其特征在于，步骤为：
(1)将产目的物的发酵菌株培养至一定阶段，提取并检测发酵液中rDNA含量；
(2)利用板框过滤、微滤膜除菌进行固液分离；
(3)在发酵液上清中添加絮凝剂，并根据发酵产物的耐热稳定性将温度控制在50-70℃之间；
(4)利用微滤膜对步骤(3)获得的发酵液进行二次过滤，之后利用超滤膜进行浓缩；
(5)在步骤(4)获得的浓缩液中添加鱼精蛋白，低速搅拌后利用超滤膜除杂；
(6)在超滤膜透过液中添加核酸酶，过夜水解。
(7)利用喷雾干燥塔对步骤(6)获得的水解液进行干燥。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述絮凝剂添加比例为0.01％-2％，絮凝剂可以是碱式氯化铝或聚合硫酸铁，所述超滤膜为30kDa超滤膜。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述浓缩体积需在5～10倍。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述浓缩体积为10倍。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)鱼精蛋白添加比例为0.05-1％，低速搅拌3-10h后利用50-100kDa的超滤膜除杂，所述步骤(6)核酸酶添加比例为0.01-1％过夜水解温度为30-60℃。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，鱼精蛋白的添加量为0.5％。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述干燥温度设定在140-190℃。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵工程菌包括酿酒酵母、毕赤酵母、黑曲霉在内的真核菌属，也包括芽孢杆菌属、肠球菌属、梭菌属在内的原核菌属，所述酶制剂包括植酸酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、酸性蛋白酶、淀粉酶在内的工业酶制剂，也包括利用发酵法生产的氨基酸、维生素等其它生物制品。
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