[发明专利]一种人血清纤维胶凝蛋白ficolin-2的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种人血清纤维胶凝蛋白ficolin‑2的单克隆抗体及其应用。本发明提供的杂交瘤细胞株，其保藏编号分别为CCTCC No:C201943。利用本发明提供的单克隆抗体5B3可制备用于检测人ficolin‑2蛋白的免疫检测工具。本发明的双抗夹心ELISA方法，检测2μg/ml的ficolin‑2蛋白仅需要1:409600稀释度的ficolin‑2单克隆抗体5B3即可。本发明获得的人ficolin‑2单克隆抗体5B3与Ficolin‑2蛋白的结合位点和商业化单抗（sc‑130297）与Ficolin‑2蛋白的结合位点不同，效价更高。因此本发明的单克隆抗体具有更广泛的应用空间。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及抗人ficolin-2的单克隆抗体，产生该抗体的杂交瘤细胞株，以及该抗体的免疫检测用途。

背景技术

纤维胶凝蛋白(ficolin)属于补体凝集素，是重要的天然免疫分子。作为可溶性模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)，ficolin能识别病原微生物表面的病原相关模式分子(pathogen-associated molecular pattern,PAMP)，并能与甘露糖结合凝集素(Mannose-binding lectin,MBL)相关丝氨酸蛋白酶(MBL-ssociated serineproteases,MASPs)结合而激活补体凝集素途径，还能作为调理素与吞噬细胞表面受体结合而介导调理吞噬作用。

ficolin-2(FCN-2))是纤维胶凝蛋白ficolin中的一种，也被称为P35、L-ficolin、EBP-37hucolin。FCN-2蛋白主要由肝细胞合成分泌。其与MBL具有类似的结构和功能，具有凝集素活性，能通过识别病原体表面的寡糖结构，继而通过lectin途径激活补体。

正常人血清中ficolin-2属于一种重要补体凝集素蛋白，在急性应急反应、炎症反应或感染时会发生浓度上升可以作为炎症性疾病等预警指标。疾病恢复正常后其浓度又回归正常，其与CRP也呈正相关性，因而可作为炎症等监控指标(Yang YF,et al.,FCN-A/2,acting as a new regulator of macrophage polarization,mediates theinflammatory response in experimental mouse colitis.Immunology.2017,151(4):433-450.)。另外，孕妇血浆ficolin-2水平低，可能发生妊娠子癇前症。因此，利用ficolin-2的单抗可以制备人血清纤维胶凝蛋白(ficolin-2)检测试剂盒。现有技术中抗人ficolin-2的单克隆抗体主要有sc-130297(SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY,INC.)，但它与ficolin-2的结合位点有限，研究不同抗人ficolin-2的单克隆抗体将有助于提高纤维胶凝蛋白检测的灵敏度和特异性。

发明内容

本发明的目的在于提供一株能稳定分泌特异性识别人血清纤维胶凝蛋白(ficolin-2)的单克隆抗体5B3的杂交瘤细胞株以及该单克隆抗体在制备用于检测ficolin-2蛋白的免疫检测工具中的应用。本发明的单克隆抗体效价高、特异性强，因此具有更广泛的应用空间。

为实现上述目的本发明提供以下技术方案：

第一方面，提供一种分泌抗人ficolin-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株是保藏编号为CCTCC NO：C201943的小鼠抗人ficolin-2单克隆抗体杂交瘤细胞5B3。是纯化的重组ficolin-2-GST融合蛋白(ficolin-2基因编码序列(NM_004108.3))免疫小鼠后至尾血效价检测达1:10000左右或以上后，加强免疫后进行细胞融合，带His标签的ficolin-2重组蛋白(ficolin-2基因编码序列(NM_004108.3))筛选获得。