[发明专利]一种鸭腺病毒2型DNA疫苗及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201910315101.0 | 申请日： | 2019-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN110317830A | 公开（公告）日： | 2019-10-11 |
| 发明（设计）人： | 任广彩;陈瑞爱;黄妙容;李琳;李延鹏;罗琼;张文炎;刘之文 | 申请（专利权）人： | 肇庆大华农生物药品有限公司;华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A61K39/235;A61P31/20 |
| 代理公司： | 深圳市道臻知识产权代理有限公司 44360 | 代理人： | 陈琳;朱亚 |
| 地址： | 526000 *** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 腺病毒 制备 制备方法和应用 细胞 攻毒保护 抗原蛋白 质粒转染 表达量 免疫学 番鸭 构建 质粒 蛋白 疫病 疫苗 合成 预防 应用 | ||
1.一种鸭腺病毒2型DNA疫苗的制备方法，包括下述步骤：
(1)、合成SEQ ID NO.3所示的DAV-hexon序列；
(2)、构建pcDNA3.1-DAV-hexon质粒；
(3)、pcDNA3.1-DAV-hexon质粒转染293T细胞，在293T细胞中表达得到hexon蛋白即鸭腺病毒2型DNA疫苗。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)的具体步骤为：将SEQ IDNO.3所示DAV-hexon序列克隆到真核表达载体pcDNA3.1上，得到pcDNA3.1-DAV-hexon质粒。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)的具体步骤为：
(a)、转染前3h PBS洗涤293T细胞2次，更换不含血清培养基DMEM；
(b)、取0.5ug质粒DNA溶于50ul无血清DMEM中，轻轻混匀，室温静置5min；
(c)、将1.5ul的LipoHigh转染试剂溶于50ul无血清DMEM中，轻轻混匀，室温静置5min；
(d)、将步骤(c)制得的含有LipoHigh的稀释液加入步骤(b)制得的含有质粒DNA的稀释液中，轻轻混匀，室温静置20min；
(e)、将步骤(d)制得的上述转染工作液，逐滴滴入步骤(a)制得的对应细胞培养液中，轻轻混匀后置于37℃，5％CO2培养箱中培养；
(f)、8h后更换含有血清的新鲜培养基；
(g)、48h后免疫荧光染色。
4.一种鸭腺病毒2型DNA疫苗，其特征在于：所述鸭腺病毒2型DNA疫苗由权利要求1～3中任一权利要求所述的制备方法制得。
5.权利要求4所述的鸭腺病毒2型DNA疫苗在制备预防鸭腺病毒2型疫病疫苗中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于肇庆大华农生物药品有限公司;华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司，未经肇庆大华农生物药品有限公司;华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910315101.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
