[发明专利]一种热稳定口蹄疫O型重组病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种热稳定口蹄疫O型重组病毒，其特征在于，以O/rV病毒株为基本病毒株，包括结构蛋白VP2第98位酪氨酸突变为苯丙氨酸。

2.根据权利要求1所述的热稳定口蹄疫O型重组病毒，其特征在于，突变后的结构蛋白VP2的氨基酸序列为SEQ ID No.1。

3.根据权利要求2所述的热稳定口蹄疫O型重组病毒，其特征在于，突变后的结构蛋白VP2的核苷酸序列为SEQ ID No.2。

4.权利要求1～3任意一项所述热稳定口蹄疫O型重组病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)利用基因合成技术合成含突变后的结构蛋白VP2第93位丝氨酸和98位酪氨酸突变均为苯丙氨酸的核苷酸序列，插入pUC质粒中，得到pUC/VP2S93F+Y98F；

所述结构蛋白VP2第93位和98位氨基酸均突变为苯丙氨酸的核苷酸序列为SEQ IDNo.5；

2)将所述pUC/VP2S93F+Y98F或pOMQ-Z123用Bam H I和Bss H II酶消化，得到含VP2突变片段或线性pOMQ-Z123；

3)将所述步骤2)得到的含VP2突变片段和线性pOMQ-Z123连接，得到pBG；

5)将所述步骤3)中的pBG或pSK-Z4用Spe I和Bgl II酶消化，回收5400bp目的片段或线性pSK-Z4；

6)将所述步骤5)中5400bp目的片段和线性pSK-Z4连接，得到pQEC；

7)将所述步骤6)中的pQEC转染至单层BSR/T7细胞，培养，收获和冻融细胞，收集病毒；

8)将步骤7)收集的病毒传代培养8代以上，得到热稳定口蹄疫O型重组病毒。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中Bam H I和Bss H II酶消化的条件为37℃。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤5)中Spe I和Bgl II酶消化的条件为37℃。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)或步骤5)中连接用酶为T4连接酶，所述连接的条件为16℃过夜连接。

8.权利要求1～3任意一项所述热稳定口蹄疫O型重组病毒或权利要求4～7任意一项所述制备方法制备的热稳定口蹄疫O型重组病毒在热稳定口蹄疫O型灭活疫苗生产中的应用。