[发明专利]牛猪鸭三重荧光PCR检测引物探针及试剂盒与检测方法

说明书

本发明公开了牛猪鸭三重荧光PCR检测引物探针及试剂盒与检测方法，利用3对扩增引物BOS‑F/BOS‑R、SUS‑F/SUS‑R和Anas‑F/Anas‑R，以及对应的3条探针BOS‑probe、SUS‑probe和Anas‑Probe形成牛猪鸭源成分三重荧光PCR检测反应体系，并建立牛猪鸭三重荧光PCR检测方法。本发明检测时间短，成本低，检测特异性和灵敏度高。

技术领域

本发明涉及食品安全肉源检测技术领域，具体涉及一种牛猪鸭源成分三重荧光PCR检测引物探针及试剂盒与检测方法。

背景技术

我国食品行业进入了飞速发展时期，各种肉类和肉制品丰富了人们的生活，然而近年来肉制品屡屡出现掺假现象。表现为用鸡肉冒充猪肉，鸭肉、猪肉经加工后冒充牛羊肉，狐狸肉冒充驴、牛、羊肉。如2014年济南沃尔玛狐狸肉事件。而市场上越来越多的肉制品含有多种类型动物源性肉成分，同一份样品往往需要同时开展多种动物源性成分检测。因此市场上对快速鉴别肉制品具体成分的需求越来越迫切。

发明内容

本发明的一个目的是提供牛猪鸭属水平PCR检测引物、探针组合物，包括3对扩增引物BOS-F/BOS-R、SUS-F/SUS-R和Anas-F/Anas-R，以及 3对扩增引物分别对应的3条探针BOS-probe、SUS-probe和Anas-Probe，其具体信息如下：

BOS-F：5’-CGGAGCATCTATTGTAGC-3’，原始浓度为10uM；

BOS-R：5’-AGTGGTGGTGGATATTTAAG-3’，原始浓度为10uM；

SUS-F：5’-CTAACACAAGCCACAGCCTCCA-3’，原始浓度为10uM；

SUS-R：5’-GCTTGTAGTGAAATGCCTTG-3’，原始浓度为10uM；

Anas-F：5’-TGCCCATCATAATTGGAG-3’，原始浓度为10uM；

Anas-R：5’-CAGGTGAAGTGAGAAGATAG-3’，原始浓度为10uM；

BOS-probe：5’-TCTTGAGCACCAGCATAATGATAGGC-3’，原始浓度为10uM；

SUS-probe：5’-CCAGAATATAGGAGGTTGATGATG-3’，原始浓度为 10uM；

Anas-probe：5’-CACCGCAGACACATCCCTTGCTTTCT-3’，原始浓度为10uM；

本发明的另一个目的是提供一种牛猪鸭源成分三重荧光PCR检测试剂盒及检测方法。

试剂盒包括pH值为8.3的10×PCR buffer，浓度为25mM的MgCl₂，浓度为2.5mM的dNTP(dATP、dTTP、dGTP、dCTP)，浓度为5U/μl的 Taq DNA聚合酶，浓度为1mg/ml的牛血清白蛋白BSA，原始浓度为10uM 的3对扩增引物BOS-F/BOS-R、SUS-F/SUS-R和Anas-F/Anas-R，以及原始浓度为10uM的3条探针BOS-probe、SUS-probe和Anas-Probe。

牛猪鸭源成分三重荧光PCR检测方法，具体步骤如下：

(1)DNA模板的制备

取待检测的动物肌肉组织，用剪刀剪碎混匀，称取100mg样本于1.5ml 离心管内，加入500ul提取液，震荡混匀，80℃温浴加热10min，然后取出放入离心机12000rpm离心，移液枪吸取上清100ul备用。

(2)形成牛猪鸭源成分三重荧光PCR检测反应体系