[发明专利]一种检测四环素药物的磁性上转换荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种检测四环素药物的磁性上转换荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用，属于食品安全检测技术领域。磁性上转换荧光复合微球，包括Fe内核、包覆所述Fe内核的Fe₃O₄壳层和包覆所述Fe₃O₄壳层的含有镧系元素的磁性上转换荧光壳层，形成一种核‑壳‑壳型磁性荧光复合微球；在所述磁性上转换荧光壳层的外表面修饰有‑NH₂基团；所述磁性上转换荧光复合微球的直径为20～30nm。核‑壳‑壳型磁性上转换荧光复合微球作为荧光响应元件与四环素药物的单克隆抗体偶联来制备免疫层析试纸条。所述免疫层析试纸条具有检测灵敏度高的特点。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种检测四环素药物的磁性上转换荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

四环素(Tetracycline，TC)，是四环素族抗生素中最基本的化合物。该类抗生素广泛应用于革兰阳性和阴性细菌、细胞内支原体、衣原体和立克次氏体引起的感染。因其广谱抗菌活性、良好的口服吸收效果、低毒性、低成本等特点得到了广泛的应用。随着临床上四环素类抗生素耐药菌的大量产生及对其不良反应的深入了解，部分四环素类抗生素逐渐从临床应用退出。然而，包括美国在内的许多国家，将四环素作为生长促进剂投喂给动物，导致副产品中残留四环素的问题。目前，在肉、蜂蜜和牛奶等动物产品中发现了四环素残留。由于人类处于食物链的顶端，通过食物链的富集作用，动物产品中残留的四环素会对人体造成危害甚至无形地加强了细菌对四环素类抗生素的抗性。为此，世界各国对TCs残留的检测十分关注。我国规定了牛奶中四环素残留限量为100μg/L，加强对四环素药物检测技术的研究和快速检测技术的发展是非常有必要的。

目前，检测四环素比较经典的方法包括高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)等，这些都是比较传统的方法，也是目前的确证方法。另外，目前常用的还有酶联免疫法(ELISA)。但由于以上方法均需先进的检测仪器，检测费用昂贵、步骤繁琐耗时，且对操作人员专业性要求较高，不适用于基层企事业单位的大通量快速筛查检测。胶体金免疫层析法具有检测速度快、价格便宜、操作简单等优点，是目前国内外检测四环素药物的主要监控方法，但仍存在一些缺陷，如稳定性较差、灵敏度较低、无法实现定量检测、基质效应明显背景干扰大，且颜色单一，难以实现批量检测的目的。

上转换荧光免疫层析技术是继胶体金免疫层析技术后，在磁性上转换荧光复合微球标记技术上发展起来的，作为一种免疫学检测方法，它结合了上转换荧光技术、免疫标记技术和免疫层析技术的各个优点，具有快速、操作简便等优势。上转换荧光颗粒作为标记物，与胶体金、磁性纳米材料、乳胶微球、量子点、荧光素等相比，该标记物属于惰性无机发光材料，具有耐用性强、稳定性好、有效期长、通量高、无干扰等特点，已成为标记免疫层析技术的研究热点。但是传统的上转换磁性上转换荧光复合微球的发光强度随粒径增大而增强，为了保证检测的荧光强度，过大的粒径会导致在层析过程中流动性差，从而降低检测灵敏度。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供磁性上转换荧光复合微球及其制备方法、检测四环素层析试纸条及其应用，所述磁性上转换荧光复合微球具有稳定性好且发光效率高的特点，以磁性上转换荧光复合微球作为发色标志物制备的检测四环素层析试纸条检测灵敏度高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种磁性上转换荧光复合微球，包括Fe内核、包覆所述Fe内核的Fe₃O₄壳层和包覆所述Fe₃O₄壳层的含有镧系元素的磁性上转换荧光壳层；在所述磁性上转换荧光壳层的外表面修饰有-NH₂基团；所述磁性上转换荧光复合微球的直径为20～30nm。

优选的，所述镧系元素包括钇、镱或铒。