[发明专利]利巴韦林半抗原和人工抗原及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及利巴韦林半抗原和人工抗原及其制备方法与应用。所述利巴韦林半抗原的结构如式(I)或式(II)所示：所述利巴韦林人工抗原是由式(I)或式(II)所示半抗原与载体蛋白偶联得到。利用所述利巴韦林人工抗原免疫动物，可得到效价高，灵敏度高的特异性抗体。本发明提供的利巴韦林半抗原及其制备的抗体，为建立快速、简便、价廉、灵敏、特异的利巴韦林检测方法提供了新手段。

技术领域

本发明属于生物化工技术领域，具体地说，涉及利巴韦林半抗原和人工抗原及其制备方法与应用。

背景技术

利巴韦林(Ribavirin，RBV)，又称病毒唑、三氮唑核苷，是一种合成的嘌呤核苷类似物。1972年由美国ICN公司研究开发，1974年于墨西哥首次上市，1980年我国正式批准投产。利巴韦林是一种广谱抗病毒药，对多种RNA病毒和DNA病毒有抑制作用，甲型、乙型流感病毒最敏感，作用机制是其在体内代谢为利巴韦林基团(1,2,4-三唑-3-羧酰胺)，该产物可以抑制病毒聚合酶，干扰病毒RNA的合成，从而阻断病毒的复制。此外，利巴韦林还可以诱导T细胞表型转化，从而增强T细胞介导的体液免疫反应。

利巴韦林在发挥广泛的抗病毒作用同时，其毒副作用也日益受到关注，长期以来，为了预防畜禽流感，利巴韦林也被广泛应用于畜禽养殖过程中。为了保证人类用药安全和动物防疫安全，2005年农业部发布第560号公告，禁止利巴韦林、金刚烷胺、吗啉胍等抗病毒药物在动物养殖中使用。然而利巴韦林在畜禽养殖过程违规使用的现象仍然普遍存在，畜禽产品质量安全受到一定的威胁。

目前，利巴韦林的检测手段主要为液相色谱(LC)、液质联用(LC-MS/MS)方法，但由于大型仪器价格昂贵、操作复杂、便携性差，难以实现生产一线的检测，严重制约了对于利巴韦林使用的有效监管。基于抗原-抗体特异性反应的免疫分析技术，具有检测速度快，成本低的优点，因此设计免疫半抗原分子，开发一种简单、快捷、用于检测利巴韦林的抗体显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供利巴韦林半抗原和人工抗原及其制备方法与应用。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供利巴韦林半抗原，其结构如式(I)或式(II)所示：

第二方面，本发明提供所述半抗原的制备方法，当所述利巴韦林半抗原为式(I)所示化合物时，制备方法包括如下步骤：

1)将48.0g利巴韦林、6.17g对甲苯磺酸和39.2mL 2,2-二甲氧基丙烷溶于500mL丙酮中，混合液在60℃反应3h；加入1mL 5％的碳酸氢钠终止反应；清除沉淀后，收集和浓缩滤液，经柱层析纯化后得到式(III)化合物；

2)将35.0g对氟苯甲酸、15.0g二甲氨基吡啶溶于500mL叔丁醇中冷却至0℃；向混合液中添加107.50g二碳酸二叔丁酯，然后在室温下搅拌16h，得到无色油状产物，将该无色油状产物与15.0g式(III)化合物和60.0g碳酸铯溶于300mL二甲基亚砜中，110℃持续加热16h；二甲基亚砜通过减压蒸馏除去；向残余物中加入200mL水，使用二氯甲烷萃取，并用硫酸钠干燥后浓缩，残余物通过柱层析进行净化，将得到的6.0g白色固体状产物在室温下溶解于盐酸和四氢呋喃的混合液100mL中，搅拌16h，用碳酸氢钠调pH至7-9，过滤混合物后得到粗产物；粗产物进一步与甲醇结晶，即得。

其中，步骤2)进行柱层析所用流动相由甲醇和二氯甲烷按50:1体积比混合而成，所用固定相为200-300目的硅胶。

所述盐酸和四氢呋喃的混合液是由四氢呋喃和浓度12mol/L的盐酸按9:1体积比混合而成。

当所述利巴韦林半抗原为式(II)所示化合物时，制备方法如下：