[发明专利]QuEChERS-液相色谱-质谱/质谱法测定蜂蜜中双甲脒及代谢产物残留量的方法

说明书

本发明涉及蜂蜜中双甲脒及其3种代谢产物残留量测定的方法，尤其涉及QuEChERS‑液相色谱‑质谱/质谱法同时测定蜂蜜中双甲脒及其3种代谢产物残留量的方法。该方法在试样中加入pH=7的缓冲溶液稀释后用乙腈和氯化钠进行提取、盐析，通过含有N‑丙基乙二胺（PSA）、无水硫酸镁和C₁₈粉末的吸附剂进行分散固相萃取对提取液进行净化，采用液相色谱‑质谱/质谱仪检测，同位素内标稀释内标法定量。该方法绿色友好、简便快捷，消耗资源小，检测成本低，方法灵敏度能满足蜂蜜中双甲脒及其3种代谢产物残留量的检测和确证要求。

技术领域

本发明涉及蜂蜜中双甲脒及其3种代谢产物残留量测定的方法，尤其涉及一种QuEChERS-液相色谱-质谱/质谱法同时测定蜂蜜中双甲脒、单甲脒2,4-二甲基苯基甲酰胺和 2,4-二甲基苯胺残留量的方法。

背景技术

蜂蜜因自身富含多种维生素、矿物质和氨基酸以及人体可直接吸收的单糖(葡萄糖、果糖)等200多种类营养物质，且对于便秘、胃和十二指肠溃疡病等都有良好的辅助医疗作用，同时可提高人体免疫力，因此作为一种营养丰富的食品越来越被广大消费者所接受。伴随人民生活水平的提高，对蜂蜜的需求量也不断增加，其质量安全直接关系到人体健康。其中蜂蜜中药物残留情况一直是消费者除营养成分外的主要关注点，我国药物和抗生素曾经的滥用情况较为突出，蜂蜜中氯霉素等药物的检出曾对其出口造成严重的不利影响。

双甲脒(Amitraz)，又称N,N-双(2,4-二甲苯亚氨基甲基)甲胺，是一种有机氮杀虫、杀螨剂，其具有触杀和熏蒸作用，对叶螨科各发育阶段的虫态都有效。因此广泛用于果树、蔬菜、茶叶、棉花、大豆、甜菜等作物防治多种害螨，对同翅目害虫也具有良好药效，还可以用于防治蚜虫、棉铃虫、红铃虫等害虫。对牛、羊、猪等家畜体外寄生螨也有效，可以防治体虱、壁虱、疥癣和恙虫等，在蜂蜜养殖中对蜂螨有较好的防治效果，且对蜜蜂属于低毒性，因此曾被广泛用于蜂巢除螨。根据双甲脒的化学性质，其可发生代谢或降解，先形成单甲脒(N-2,4-Dimethyl phenyl-N-methylformamidine，DMPF)、2,4-二甲基苯基甲酰胺 (N-(2,4-DiMethylphenyl)formamide，DMF)，最终降解为2,4-二甲基苯胺(2,4-Dimethylaniline，DMA)。其中单甲脒既是双甲脒的一个代谢产物，其自身也是杀螨剂，能防治抗三氯杀螨醇的螨，杀螨卵、若螨和成螨，对棉红铃虫、水稻三化螟和二化螟也有一定活性。单甲脒在防治柑橘、苹果、棉花等作物上的螨，对瓢虫、草蛉、食虫蝽象、食螨瓢虫、棉田蜘蛛、蜜蜂、家蚕比较安全，其毒性较双甲脒要低。2,4-二甲基苯胺在化工合成中通常作为单甲脒和双甲脒的合成原料而被使用，但研究表明2,4-二甲基苯胺具有毒副作用和致突变性，对肝脏的损伤较大。

通过食物链传播或直接在蜂巢中使用双甲脒后，所产生的蜂蜜比较容易被双甲脒及其代谢产物污染，进而影响消费者的身体健康，如表1所示，各国纷纷制定双甲脒在蜂产品中(以蜂蜜居多)的最低限量，来保证其的质量安全。

表1主要国家和经济体对蜂产品中双甲脒的限量要求

韩国等国家虽然在蜂蜜中并未明确规定双甲脒的限量要求，但在猪肉等其他动物源性产品以及果蔬产品中双甲脒的最低限量都有明确规定，我国在出口蜂蜜的残留监控中也明确要求双甲脒不得检出(同时检测代谢产物)。

基于双甲脒的稳定性以及代谢情况和检测手段的限制，目前食品中双甲脒残留量的测定通常是将样品通过酸、碱环境下高温水解后对最终代谢产物2,4-二甲基苯胺进行测定，再数学转化成双甲脒的含量。其中以气相色谱法或者气相色谱-质谱法为主。