[发明专利]利用线粒体NADH5基因精准鉴别金边鲤的方法

说明书

本发明公开了一种利用线粒体NADH5基因精准鉴别金边鲤的方法，该方法包括以下内容：（1）提取待鉴定金边鲤的DNA；（2）利用引物对金边鲤个体DNA模板进行PCR扩增；（3）对扩增产物进行回收；（4）对引物的PCR扩增产物进行克隆并测序；（5）对序列进行比对分析。本发明利用线粒体NADH5基因鉴别金边鲤，发现金边鲤NADH5基因序列与公开提交的鲤鱼序列相似度为99%，即金边鲤属于鲤鱼的一种；但金边鲤序列的247位点和559位点的碱基分别为A和C，与其他鲤鱼对应位点的G和T碱基又有所不同，从而能精准地鉴别出金边鲤。使用本发明的方法鉴别金边鲤，弥补了形态学鉴别的不足，为金边鲤地方品种的保护与解决养殖种的商业纠纷提供了参考。

技术领域

本发明属于鉴定鱼类物种的生物技术领域，具体涉及一种用于鉴别金边鲤和其他鲤鱼的精准方法，实际是利用线粒体NADH5基因精准鉴别金边鲤的方法。

背景技术

鲤鱼学名：Cyprinus carpio。原产亚洲，后引进欧洲、北美以及其他地区，杂食性。鳞大，上腭两侧各有二须，单独或成小群地生活于平静且水草丛生的泥底池塘、湖泊、河流中。从营养价值角度说，鲤鱼的蛋白质不但含量高，而且质量也佳，人体消化吸收率可达96%，并能供给人体必需的氨基酸、矿物质、维生素A和维生素D；每100g肉中含蛋白质17.6g、脂肪4.1g、钙50mg、磷204mg及多种维生素；鲤鱼的脂肪多为不饱和脂肪酸，能很好的降低胆固醇，可以防治动脉硬化、冠心病，因此，多吃鲤鱼可以健康长寿。从药用角度说，鲤鱼性平、味甘，具有健脾养胃，利水消肿，通乳安胎，止咳平喘等作用。可用于脾胃虚弱、食少乏力、脾虚水肿等症。鲤鱼还具有观赏价值。

鲤鱼是我国南北各地广泛分布的鱼类，由于它具有很高的经济价值和改善库塘养殖条件，提高产量的特点，成为养殖家鱼的主要品种。鲤鱼呈柳叶形，背略隆起，嘴上有须，鳞片大且紧，鳍齐全且典型，肉多刺少。鲤鱼的种类很多，按生长水域的不同，鲤鱼可分为河鲤鱼、江鲤鱼、池鲤鱼。

融水苗族自治县位于广西壮族自治区北部，云贵高原苗岭山地向东延伸部分，地处东经109°14′，北纬25°04′，全年平均气温17℃至19.6℃。年内极端最高气温36.9℃，县城年极端最低气温0.5℃，其中高寒山区最低气温-4.1℃，常年雨水充足，适宜淡水鱼、冷水鱼、亚冷水鱼养殖。融水金边鲤就是生活在这一特定地理环境下的一个地方鲤鱼种群。近几年，融水金边鲤以绿色生态、肉质鲜美以及较高的抗洪抗病性能，在湘、黔、桂交界地区享有较高的名气，经济价值也逐年提高。但该种群只有约10%的个体头部顶端上缘一直到尾部上缘的皮肤为金色，连续或断续连成一条金色粗线，似一条“金边”在鱼的背部，其余90%的个体的外形与多个鲤鱼地理种群和人工选育品种相似，尤其是鱼种阶段，难以通过外形区别鉴定，因此，有必要发明一种精准鉴别金边鲤的方法，为金边鲤种群的早期鉴别、品种种质鉴定以及商业养殖中产生的纠纷提供准确的鉴定依据。

线粒体基因组作为一个小分子量环状分子(脊椎动物中约为16kb)，一般认为它具有比核DNA高几倍的进化率。由于在绝大多数动物中它们是单亲(系)遗传，因而没有像核基因存在的重组现象。线粒体DNA作为遗传标记被越来越广泛地应用于群体遗传和系统进化的研究。专利CN 104450921 A，公开通过比较鲫鱼线粒体NADH4 基因中110-866 位点序列信息与鲤鱼线粒体基因序列的相似度，可以精确鉴定长丰鲫。

发明内容

基于此，本发明提供了一种利用线粒体NADH5基因精准鉴别金边鲤的方法，利用线粒体NADH5基因鉴别金边鲤，发现金边鲤NADH5基因序列与公开提交的鲤鱼序列相似度为99%，即金边鲤属于鲤鱼的一种；但金边鲤序列的247位点和559位点的碱基分别为A和C，与其他鲤鱼在对应位点的G和T碱基又有所不同，从而精准地鉴别出金边鲤，弥补了形态学鉴别的不足，为金边鲤地方品种的保护与解决养殖种的商业纠纷提供了参考。

本发明所述利用线粒体NADH5基因精准鉴别金边鲤的方法包括以下内容：