[发明专利]鉴定根肿病菌4号生理小种的特异基因、特异性引物、含有所述引物的试剂盒及其应用

权利要求书

1.PBRA003268基因在检测根肿病菌(P. brassicae ) 4号生理小种中作为检测靶标的应用，所述基因的序列如SEQ No.1所示。

2.用于检测根肿病菌(P. brassicae ) 4号生理小种的特异性引物对，所述引物对是：

PBRA003268-F：gaataggaaacccgccctgt

PBRA003268-R：cgtgatcgtaccaagacgca。

3.根肿病菌(P. brassicae ) 4号生理小种的检测方法，所述方法包括以下步骤：

（1）待检测样品的制备

通过CTAB法提取待检测样品的DNA，得到含有待检测样品DNA的溶液；

（2）PCR扩增

以步骤（1）的DNA为模板，用权利要求2的特异性引物对PBRA003268-F和PBRA003268-R进行PCR扩增；

（3）凝胶电泳结果判断

对步骤（2）的PCR扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳检测，当扩增产物大小为248bp时表明检测样品中的DNA中具有根据权利要求1所述的基因PBRA003268，判断该检测样品含有根肿病菌(P. brassicae) 4号生理小种。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于步骤（1）中，待检测样品是提纯的根肿菌休眠孢子，或待检测植株的根瘤。

5.权利要求1的基因PBRA003268在萝卜(Raphanus sativus L.)、油菜(Brassicanapus L.)、芥菜(Brassica juncea (L.) Czern. et Coss.)、甘蓝( Brassica oleraceaL.)、花菜(Brassica oleracea L. var. botrytis L.)或小白菜(Brassica campestrisL. ssp. ChinensisMakino (var. communisTsen et Lee))中检测根肿菌4号生理小种的应用。

6.含有权利要求2所述的特异性引物对的检测试剂盒。

7.用于检测根肿病菌(P. brassicae ) 4号生理小种的基因类型的特异基因的组合，所述特异基因的组合是如SEQ No.1所示的基因PBRA003268、如SEQ No.3所示的基因Novel512和如SEQ No.4所示的基因Novel137。

8.用于检测根肿病菌(P. brassicae ) 4号生理小种的基因类型的特异性引物对，所述引物对是以下三对引物：

用于检测如SEQ No.1所示的PBRA003268的引物：

PBRA003268-F：gaataggaaacccgccctgt

PBRA003268-R：cgtgatcgtaccaagacgca

用于检测如SEQ No.2所示的Novel512的引物：

Novel512-F；gagtgatgagcccgtactgc

Novel512-R：agctgaggggaattccttgg

用于检测如SEQ No.3所示的Novel137的引物：

Novel137-F： acgctggaacgcatagaaca

Novel137-R： catacgggtggatacgggtg。