[发明专利]基于FRET效应探测细胞凋亡过程的方法

权利要求书

1.基于FRET效应探测细胞凋亡过程的方法，包括以下步骤：

S1，制备具有长寿命的磷光铱配合物作为给体D；

S2，制备有机荧光小分子化合物作为受体A，受体A的寿命比给体D短，两者之间存在FRET效应；

S3，通过生物正交反应，将给体D和受体A分别连接到肽链的两端构成D-A型探针，所述肽链是能够被仅存在于细胞凋亡过程中的caspase酶剪切的肽链，所述D-A型探针在细胞外组装构成然后植入到细胞内部，或者直接在细胞内组装；

S4，利用共聚焦成像或寿命成像技术，检测D-A型探针当中给体D的寿命变化，判断细胞的凋亡进程；或检测D-A型探针当中受体A的寿命变化，判断细胞的凋亡进程。

2.根据权利要求1所述的基于FRET效应探测细胞凋亡过程的方法，其特征在于：步骤S1的方法是，首先制备得到可以同叠氮发生生物正交反应的产物，然后将其与对硝基苯基氯甲酸酯连接，再与含有氨基的物质反应生成辅助配体，辅助配体再与铱二氯桥通过配位反应制备得到磷光铱配合物。

3.根据权利要求2所述的基于FRET效应探测细胞凋亡过程的方法，其特征在于：步骤S1的方法是，以二苯并环庚酮为原料，在-78℃条件下同三甲基甲硅烷基重氮甲烷反应得到产物2；2被硼氢化钠还原制得产物3；通过加成反应将液溴加到产物3中的双键上得到产物4；产物4同LDA作用制得产物5；产物5可以同对硝基苯基氯甲酸酯发生取代反应制得产物6；用二氧化硒氧化4,4'-二甲基-2,2'-联吡啶制得产物8；产物8同盐酸羟氨反应制得产物9；产物9经过氨化反应制得产物10；产物10与产物6发生取代反应制得辅助配体11；辅助配体同苯喹啉二氯桥反应制得给体Ir-DIBO。

4.根据权利要求1所述的基于FRET效应探测细胞凋亡过程的方法，其特征在于：步骤S2的方法是，首先制备得到可以同降冰片烯发生生物正交反应的产物，然后通过缩合反应将其连接到含有羧基的短寿命的有机荧光小分子化合物上。

5.根据权利要求4所述的基于FRET效应探测细胞凋亡过程的方法，其特征在于：步骤S2的方法是，用二碳酸二叔丁酯保护对氰基苄胺上的氨基制得产物2；产物2同乙腈、Zn(OTf)2和一水合肼反应制得产物3；产物3在浓盐酸的作用下脱去氨基保护基团制得氨基四嗪；氨基四嗪上的氨基同罗丹明B上的羧基发生缩合反应制得受体四嗪罗丹明即TR。

6.根据权利要求1所述的基于FRET效应探测细胞凋亡过程的方法，其特征在于：所述给体D具有如下结构式一或结构式二

其中，C^N配体为下列中的任一个：

7.根据权利要求1所述的基于FRET效应探测细胞凋亡过程的方法，其特征在于：所述受体A具有如下结构式

其中，A为以下任意一个含有羧基的有机荧光小分子化合物：

8.根据权利要求1所述的基于FRET效应探测细胞凋亡过程的方法，其特征在于：所述D-A型探针具有如下结构式

其中XXXX为连接肽链，选自WEHD、LEHD、DETD、DEVD、DEHD、VEHD、LETD、LEHD中的任意一个。