[发明专利]一种毕赤酵母表达长效猪源干扰素的方法在审
| 申请号： | 201810364026.2 | 申请日： | 2018-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN108588111A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 王荣;左文峰;卢英杰;张磊;杜恩岐 | 申请（专利权）人： | 武汉中拓康明生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/62;C12N1/19;A61K38/21;A61K47/42;A61P31/14;A61P1/12;C12R1/84 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 430075 湖北省武汉市东湖高新技术开发区高新二*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 猪源 制备 长效干扰素 干扰素 阳性克隆子 半衰期 生物素 基因 重组真核表达载体 基因工程产品 真核表达载体 毕赤酵母 蛋白表达 甲醇诱导 构建 甲醇 重悬 接种 克隆 筛选 转化 应用 | ||
1.一种在毕赤酵母GS115中表达猪源长效 IFNλ3的方法，具体步骤如下：
1）以合成的猪λ3干扰素基因及长效元件ABD为模板，分别用引物λ3-GS-F，λ3-R，ABD-F，ABD-GS-R扩增含GS Linker的目的片段；
2）利用引物 ABD-F和λ3-R 通过PCR技术扩增全长含GS Linker的猪源ABD-GS -IFNλ3基因全长，上游引物ABD-F,下游引物λ3-R；
3）将猪源ABD- IFNλ3 基因用T5克隆法克隆到酵母pPicZαA载体，获得重组载体pPicZαA-ABD-GS-IFNλ3，并转化毕赤酵母GS115，筛选重组酵母表达菌；
4）对3）中阳性克隆子进行诱导表达，筛选干扰素高表达菌株；
5）对4）高表达菌株进行诱导表达并纯化，验证不同Linker对长效干扰素表达的影响，进一步制备干扰素样品及活性检测；
6）对5）表达样品，在MDBK及VERO细胞水平上评价干扰素活力；
7）对5）表达样品采用细胞病变抑制法检测ABD-GS-IFNλ3在猪体内的半衰期。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中λ3-GS-F:ggtggtggaggttccggtggtggaggttccgttccagttccagaagctttgaga（SEQ ID No:1）；λ3-R:tgtctaaggctacaaactcaatgatgatgatgatgatgaacacacaagtcacca（SEQ ID No:2）；ABD-F:agagaggctgaagctgaattcaccactatcgacgagtggttgctgaaa（SEQ ID No:3）；ABD-GS-R:ccggaacctccaccaccagccttcaatatctcgtcct（SEQ ID No:4）。
3.一种重组酵母菌株
4.ABD-GS-IFNλ3在制备药物中的应用，所述药物用于治疗或预防病毒感染。
5.根据权利要求5所述的应用，所述药物为兽药，用于畜禽，优选的，所述药物用于治疗猪流行性腹泻病毒引起的疾病。
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