[发明专利]肺非小细胞癌早期特异性自身抗体panel诊断试剂盒

权利要求书

1.一种早期诊断肺非小细胞癌的标志物组合，其特征在于，该组合为与血清中抗原NF2、KLF8和POU4F3相结合的自身抗体。

2.权利要求1所述的标志物组合在非小细胞肺癌的早期诊断试剂或试剂盒中的应用。

3.一种用于早期诊断肺非小细胞癌的试剂盒，其特征在于，包括产生NF2、KLF8和POU4F3自身抗体的抗原；通过抗原联合测定血清中NF2自身抗体、KLF8自身抗体和POU4F3自身抗体。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括1M碳酸氢钠缓冲液，PBST缓冲液，酶标抗体，TMB底物，终止液，ELISA panel板。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述PBST是含5％脱脂奶粉的PBST。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述含5％脱脂奶粉的PBST的配制方法为：取5g脱脂奶粉，加入100mlPBST中，配制成为5％脱脂奶粉的PBST。

7.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体为HRP标记的抗待测抗体的种属来源的IgG的抗体。

8.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述终止液为2M H₂SO₄终止液。

9.如权利要求3～8任一项所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒的操作方法为：

1)包被：用1M的碳酸氢钠缓冲液将肺癌抗原NF2、KLF8和POU4F3以各自最佳包被浓度5ug/ml、2ug/ml和2ug/ml包被于ELISA板，4℃过夜，然后使用5％脱脂奶粉的PBST封闭1.5小时；

2)加样：用含5％脱脂奶粉的PBST将待测样品血清1：100稀释，然后取100μL/孔加入上述包被有抗原的微孔板中，37℃孵育30min，PBST洗涤5遍；

3)加HRP标记的抗体：除空白孔外，各反应孔中分别加入100μl HRP标记的抗待测抗体的种属来源的IgG的抗体，37℃孵育30min，去除液体，并用PBST洗涤5遍；

4)加显色底物：在各反应孔中加入TMB底物，37℃显色15min；

5)终止反应：在各反应孔中加入2M H₂SO₄终止液；

6)结果判定：在MD-SpectraMax M5多功能酶标仪上，于波长450nm和630nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，将三种标志物的OD值带入方程，所述方程为采用logistic回归方法建立回归方程，具体为：ln(p/1-p)＝-1.038+33.766×OD_NF2+21.673×OD_KLF8+14.004×OD_POU4F3；得到的p值≥cutoff值0.43，即为阳性结果，当p值＜cutoff值0.43时，为阴性结果。