[发明专利]赤霉酸的制备方法

权利要求书

1.一种赤霉酸的制备方法，其特征在于，包括：

S1）制备赤霉酸的种子液；

S2）将赤霉酸的种子液转入发酵罐中进行发酵，得到赤霉酸发酵液；所述发酵罐中的发酵培养基，由以下组分组成：玉米蛋白粉10~40 g/L；磷酸二氢钾1~10 g/L；小分子有机碳源5~30 g/L；植物油0.5~5 g/L；硫酸镁0.5~2 g/L；硫酸铵0.5~2 g/L；微量元素0.1~1 g/L；在发酵过程中当溶氧高于20%~30%时，补加葡萄糖与植物油；所述小分子有机碳源为蔗糖与葡萄糖；所述蔗糖与葡萄糖的质量比为（1~2）：（2~1）；所述植物油为色拉油；所述微量元素为硫酸亚铁、硫酸锌、硫酸锰、钼酸钠、硫酸铜与氯化钴；所述硫酸亚铁、硫酸锌、硫酸锰、钼酸钠、硫酸铜与氯化钴的质量比为（0.5~1.5）：（0.5~1.5）：（0.5~1.5）：（0.1~0.5）：（0.1~0.5）：（0.1~0.5）；

S3）将所述赤霉酸发酵液经膜过滤浓缩后，得到浓缩液；

S4）将所述浓缩液精制后，得到赤霉酸。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1）具体为：

A1）将冷冻保藏的GA₃菌种接入至种子培养基中进行摇瓶培养，得到悬浮液；所述种子培养基包括5~15 g/L第一有机氮源、5~15 g/L第一小分子有机碳源、1~5 g/L磷酸二氢钾、0.1~1 g/L硫酸镁与0.1~1 g/L聚丙二醇；

A2）将所述悬浮液转入种子罐中进行发酵培养，得到种子液；所述种子罐的培养基包括5~15 g/L第二有机氮源、5~15 g/L第二小分子有机碳源、1~5 g/L磷酸二氢钾、0.1~1 g/L硫酸镁与0.1~1 g/L聚丙二醇。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤A2）还包括：

发酵培养后，转入二级种子罐中继续发酵培养，得到种子液；所述二级种子罐的培养基包括5~15 g/L第三有机氮源、5~15 g/L第三小分子有机碳源、1~5 g/L磷酸二氢钾、0.1~1g/L硫酸镁与0.1~1 g/L聚丙二醇。

4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述第一有机氮源、第二有机氮源与第三有机氮源各自独立地选自大豆蛋白、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉与鱼粉中的一种或多种；

第一小分子有机碳源、第二小分子有机碳源与第三小分子有机碳源各自独立地选自蔗糖、葡萄糖、糖蜜、淀粉糊精、甘露糖与半乳糖中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S3）具体为：

B1）将赤霉酸发酵液经管式膜过滤，得到管式膜过滤清液与管式膜过滤残液；

B2）将所述管式膜过滤清液进行超滤，得到超滤清液与超滤残液；

B3）将所述超滤清液进行纳滤，得到浓缩液。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤B1）具体为：

将赤霉酸发酵液经管式膜过滤至清液体积为发酵液体积的0.2~0.6倍，然后连续加入水溶剂至清液体积为发酵液体积的1~2.5倍，得到管式膜过滤清液与管式膜过滤残液。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S4）具体为：

C1）将所述浓缩液用萃取剂萃取，得到萃取液；

C2）将所述萃取液浓缩结晶，得到赤霉酸。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤C1）具体为：

将所述浓缩液与萃取剂混合后，调节pH值至2~3，进行萃取，静置分层，得到萃取液与水相；所述浓缩液与萃取剂的体积比为1：（0.8~1.5）；

将所述水相与有机溶剂进行连续萃取，得到有机相作为浓缩液的萃取剂。