[发明专利]一种基于分子生物学的黑腹螯蜂和稻虱红螯蜂的鉴别引物及方法

说明书

本发明公开了一种基于分子生物学的黑腹螯蜂和稻虱红螯蜂的鉴别引物及方法。该引物包括上游引物F和下游引物R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。该方法包括以下步骤：提取待检测样本的基因组DNA；对待检测样本基因组DNA进行PCR扩增，将待检测样本PCR扩增产物的序列与检验序列Haplogonatopus atratus和检验序列Haplogonatopus japonicus比较。本发明不依赖专业和要求很高的形态学鉴定方法，准确快速的区分黑腹螯蜂和稻虱红螯蜂。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，涉及一种基于分子生物学的黑腹螯蜂和稻虱红螯蜂的鉴别引物及方法。

背景技术

黑腹螯蜂和稻虱红螯蜂螯蜂属于膜翅目肿腿蜂总科(Bethyloidea)螯蜂科(Dryinidae)，雌雄异形的外寄生蜂。雌虫无翅，咀嚼式口器，不仅寄生寄主致死还主动捕获取食寄主致死，是十分具有生物防治潜力的天敌。

黑腹螯蜂(Haplogonatopus atratus)和稻虱红螯蜂(Haplogonatopusjaponicus)是水稻重要害虫白背飞虱和灰飞虱的寄生性天敌，由于螯蜂兼具寄生性和捕食性，对白背飞虱和灰飞虱的发生都具有较好的抑制作用。但是由于黑腹螯蜂和稻虱红螯蜂的雌雄虫在形态上十分相似，寄生飞虱后其幼虫形成的幼虫囊即使在显微镜下也能难区分。因此，目前只能通过专业的昆虫分类专家对其进行形态学上的区分。

物种鉴定难的现状限制了对黑腹螯蜂和稻虱红螯蜂的进一步研究和利用，如在调查田间白背飞虱被螯蜂寄生率时就很难明确这2种螯蜂所占的比例，或是在田间采集到螯蜂茧未能羽化或羽化出雄蜂也非常难鉴定为何种螯蜂。为了解决这一难题，需要寻找一找分子生物学区分方法进行鉴别。

发明内容

有鉴于此，本发明针对上述的问题，提供了一种基于分子生物学的黑腹螯蜂和稻虱红螯蜂的鉴别引物及方法。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种基于分子生物学的黑腹螯蜂和稻虱红螯蜂的鉴别引物，包括上游引物F和下游引物R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4所示。

本发明还公开了一种基于分子生物学的黑腹螯蜂和稻虱红螯蜂的鉴别方法，包括以下步骤：

步骤1、提取待检测样本的基因组DNA作为PCR的模板；

步骤2、对待检测样本基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物并进行测序；

步骤3、将待检测样本PCR扩增产物的序列导入GENEDOC软件中去掉多余序列后，然后与检验序列Haplogonatopus atratus和检验序列Haplogonatopus japonicus比较，当待检测样本的序列与检验序列Haplogonatopus atratus的一致时，则该待检测样本为黑腹螯蜂；当待检测样本的序列与检验序列Haplogonatopus japonicus的一致时，则该待检测样本为稻虱红螯蜂；

其中，检验序列Haplogonatopus atratus和检验序列Haplogonatopus japonicus的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示。

进一步地，所述待检测样本为螯蜂幼虫、茧或成虫。

进一步地，所述PCR扩增体系如下：2.5μl Mg²⁺Free的10×PCRBuffer、2μl浓度为2.5mmol/L的dNTPs、1.5μl浓度为25mmol/L的MgCl₂、浓度为10μmol/L的上游引物F和下游引物R各1μl、待检测样本基因组DNA1μl、0.125μl的Taq DNA Polymerase，再加灭菌水补足25μl。

进一步地，所述上游引物F和下游引物R的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQID NO.4所示。