[发明专利]布鲁氏菌单链抗体及其用途

说明书

本发明涉及生物制品检测技术领域，公开了一种布鲁氏菌单链抗体及其用途，该单链抗体包括轻链可变区、重链可变区以及连接所述轻链可变区与所述重链可变区的接头，其中，所述轻链可变区的序列如SEQ ID NO：1的第1‑114位氨基酸所示，所述重链可变区的序列如SEQ ID NO：1的第130‑252位氨基酸所示。本发明制备了能和布鲁氏菌抗原特异性结合的单链抗体。

技术领域

本发明涉及生物制品检测技术领域，具体涉及布鲁氏菌单链抗体及其用途。

背景技术

布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌感染导致的一种人兽共患病，其基本特征是患病个体的发热和流产，给人和猪、牛、羊等多种动物的生命健康造成严重的威胁。因此，快速准确诊断布病并治疗消除布病，一直是布鲁氏菌流行国家和地区最为重要的公共卫生目标之一。

布病诊断相关研究历时已久，在诊断的技术方法，特别是血清学诊断方面取得了重要的进展，从早期的凝集试验、补体结合试验到后来的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，以及近年来报道的荧光偏振试验(fluorescencepolarization assay，FPA)均有较好的应用。凝集试验是早期常用的一种血清学诊断方法，其中较为经典的是标准试管凝集试验(standard tube agglutination test，STAT或SAT)和平板凝集试验(plate agglutination test)。这两种试验后来逐渐被灵敏度高、成本低廉、检测快速、操作简便和适合高通量筛选的虎红平板凝集试验(rose-bengal palteagglutination test，RPBT)取代。由于RPBT特异性相对较低，只能用作初筛试验。补体结合试验(complement fixation test，CFT)特异性较高，但操作步骤繁琐、耗时，应用较少。近年来发展成熟的ELISA方法逐渐得到业内人员的认可。具体而言，用于布病抗体检测的ELISA有间接ELISA(indirect enzyme-linked immunosorbent assay，iELISA)和竞争ELISA(competitive enzyme-linked immunosorbent assay，cELISA)之分。这两种方法都是世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health，OIE)标准规定的试验方法，后者也是国际贸易中动物布病检验的指定试验方法。iELISA法通过布鲁氏菌LPS包被-血清样本中抗体特异性结合-HRP标记二抗结合-显色步骤完成检测，操作简单，灵敏度高，便于高通量检测，是筛选方法。cELISA同样具备高通量的特点，通过标准化的布鲁氏菌抗原特异性抗体与血清样本中可能存在的抗体竞争与包被抗原的结合，根据显色反应来判断结果，能有效避免交叉反应导致的假阳性结果，具有更高的检测特异性，一般用作确诊性方法。用于布病抗体检测的cELISA试剂和研发越来越受到业内人士的关注和重视。

用于布病检测的cELISA试剂中，最为核心的成分是布鲁氏菌抗原特异性抗体(竞争抗体)。该抗体需要与布鲁氏菌抗原特异性地以高亲和力结合，以便在检测体系中与血清样本中的相应抗体形成竞争。目前商品化试剂盒和文献报道的都是针对布鲁氏菌抗原的单克隆抗体。相比多克隆抗体，单克隆抗体在特异性、稳定性等性能参数上有明显的提升，也就导致了相应的cELISA试剂盒的检测性能有了一定程度的保障。但是在单克隆抗体的制备过程中，存在杂交瘤筛选比较复杂、杂交瘤细胞保存成本较高、需要喂养实验小鼠等情况。目前应用较多的小鼠腹水诱生法制备单克隆抗体存在不同程度的批间差异，从而给产品的质量控制带来更大的工作量。就此而言，基于基因工程技术制备的单链抗体相比于单克隆抗体更具优势，一旦获得相应的DNA序列和表达质粒，就可以通过原核生物—大肠杆菌来进行大批量生产，从而实现抗体的低成本、高效率、高质量的大量制备，因此，制备单链抗体具有更为重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的不足，提供一种布鲁氏菌单链抗体及其用途。