[发明专利]胶质瘤预后标志物hsa_circ_0135404及应用

说明书

本发明公开了一种胶质瘤预后标志物hsa_circ_0135404及应用，即检测胶质瘤来源的circRNA hsa_circ_0135404的试剂用于制备胶质瘤患者的预后制剂。通过研究证实胶质瘤中circRNA hsa_circ_0135404表达量较高的患者，拥有更高的术后生存率。通过检测胶质瘤患者胶质瘤组织中circRNA hsa_circ_0135404的表达水平，从而对胶质瘤患者做出预后判断。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于胶质瘤预后的circRNA标志物、以及检测该标志物的试剂用于制备胶质瘤预后制剂的应用、还有试剂盒。

背景技术

胶质瘤是最常见的中枢神经系统的恶性肿瘤,具有较强的侵袭性和进展性。目前临床治疗上采用的主要方法有手术切除、放疗及化疗的综合疗法,但由于胶质瘤的生长特性,与周围脑组织界限不清,手术难以切除完全,而放疗、化疗由于胶质瘤对其耐受性等治疗的局限性,疗效有限,患者中位生存期较短,尤其对于高级别胶质瘤,治疗后复发率较高,预后差,中位生存期不足一年,病死率高,严重威胁患者生命影响人类健康。因此，寻找胶质瘤预后标志物对患者进行预后分析，以提高胶质瘤患者的术后生活质量，并相应地选择合理的后续治疗方案，提高生存率，是神经科学领域亟待解决研究任务。

circRNA是一类广泛且多样地存在于哺乳动物细胞中、具有调控基因表达作用的内源性非编码RNA分子，具有共价闭合的环形结构，广泛存在于各种细胞中，也是继microRNA(miRNA)后RNA家族的最新研究热点。近年来，随着深度测序技术的广泛应用和生物物理和信息学技术的快速发展，人们发现人类许多外显子的转录本可被非线性地反向剪接或通过基因重排而形成circRNA，且它们在所有剪接转录本中占了相当大的比例，并具有丰富性、稳定性、高保守性和时空特异性等特征，有作为诸多疾病分子标志物的潜力。

发明内容

本发明的第一个目的是：提供一种用于胶质瘤患者预后的胶质瘤组织来源的circRNA标志物hsa_circ_0135404，其序列如SEQ NO:1所示。

本发明的第二个目的是，提供检测所述的circRNA标志物在胶质瘤组织中表达量的试剂在制备胶质瘤预后制剂中的应用。

本发明的第三个目的是，提供一种胶质瘤预后试剂盒，能够测定胶质瘤组织中的hsa_circ_0135404的含量。

所述的胶质瘤预后试剂盒，含有检测hsa_circ_0135404含量的PCR引物。优选引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的胶质瘤预后试剂盒，除hsa_circ_0135404的引物外，还含有从胶质瘤组织中提取RNA并进行逆转录及荧光定量PCR的所有试剂。包括：

(1)从胶质瘤组织中抽提总RNA所用试剂，包括RNA稳定溶液、Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、无酶水；

(2)以总RNA为模板将hsa_circ_0135404逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶以及hsa_circ_0135404所用随机引物；

(3)将cDNA实时定量PCR所用试剂，包括circRNA hsa_circ_0135404实时荧光定量PCR特异性引物、GAPDH内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水。

申请人通过荧光定量PCR与生存曲线分析发现在22例胶质瘤患者中，胶质瘤组织来源的circRNA hsa_circ_0135404与患者的生存率相关，含量越高，生存率越高。此法为胶质瘤的预后分析提供了强有力的技术支持，有助于提高胶质瘤患者的术后生活质量，制订术后治疗方案，提高生存率，具有深远的临床意义和推广性。

附图说明