[发明专利]一种定量检测皮肤制剂中透明质酸含量的方法

说明书

本发明公开了一种定量检测皮肤制剂中透明质酸含量的方法，称取一定量样品，取水相，加入CTAB‑NaOH溶液混匀，使透明质酸和CTAB生成络合物CTAB‑HA，然后离心，取沉淀用氯化钠溶液充分溶解；再取溶解后的溶液，采用咔唑显色法检测溶液中葡萄糖醛酸含量，然后计算出透明质酸含量。该方法能排除体系中干扰物质的影响，步骤简洁、操作快速，又具有较高的准确性、重现性；在检测过程中符合现有行业标准，结果具有可比性。

技术领域

本发明属于化学定量检测技术领域，具体涉及一种定量检测皮肤制剂中透明质酸含量的方法。

背景技术

透明质酸(Hyaluronic acid，简称HA)又称糖醛酸，基本结构是由(1一β一4)D一葡糖醛酸和(1一β一3)N一乙酰基一D一氨基葡糖构成的双糖单位重复连接所组成的一种高分子量的直链粘多糖，溶于水，不溶于有机溶剂。由于其独特的生理学活性，使其在皮肤制剂工业、临床治疗等领域得到了广泛的应用。作为化妆品、临床制剂及医疗器械中的常见功效成分，如何高效、精确的检测皮肤制剂中透明质酸的含量，在控制产品的质量及产品研制方面显得至关重要。

目前，测量各类产品中HA含量的方法主要有：HPLC法、比色法、CTAB比浊法、HA特异性结合蛋白的HA定量试剂盒法及咔唑显色。但HPLC法对样品的纯度要求比较高，不适合大批量测定复杂体系中透明质酸含量，且需要专用的HPLC设备，成本较高；比色法通过透明质酸与相应试剂产生颜色反应，根据吸光值测算透明质酸含量，但当体系中成分复杂时如存在的小分子杂多糖、色素等，不经过预处理去除，会对测定结果产生干扰导致检测结果不准；CTAB比浊法利用其与透明质酸溶液特异性结合沉淀的的特性，通过浊度与透明质酸的浓度的线性相关性测定透明质酸的含量，但体系中的不透光物质以及体系中的蛋白会影响专一性和准确性。HA定量试剂盒多利用抗体分子与透明质酸的特异性结合来进行检测。如中国专利CN 102692408 A及CN 104698186 A中采用化学发光免疫法对透明质酸进行检测，将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，具有灵敏度高和准确性好的特点，克服了单纯免疫反应重复性不理想，检测周期长等缺点，但此类方法使用抗体等特异性结合的分子合成困难，且成本高，如使用放射性物质则易对环境造成污染。

咔唑显色法检测透明质酸是目前使用最为广泛的方法，药典中检测透明质酸即采用该法，但咔唑显色法的特异性差。由于皮肤制剂是以天然、合成或者提取的多种不同物质，通过一系列生产程序加工而成的化学混合物质。不同产品之间组成成分差异较大，成分含量各异。直接用咔唑显色检测时，这种化学混合物中复杂的成分，如其中的成分如糖类、胶类等在浓硫酸作用下会生成葡萄糖醛酸及类似物质，对测定结果造成干扰，从而影响对配方开发时成分的选择，同时复杂成分的干扰势必会影响对终产品品质的检测及控制。因此需要建立一种既可减少杂质的影响，又可快速而精确的检测出透明质酸含量的简便可行方法。

发明内容

本发明的目的在于克服在皮肤制剂中测量透明质酸目前存在的问题，提供一种排除体系中干扰物质的影响，操作简单易行，检测结果精准的检测方法。

本发明检测方法通过排除杂质和检测两个部分完成，包括以下步骤：

步骤1，除杂

称取一定量样品，取水相，加入CTAB-NaOH溶液混匀，使透明质酸和CTAB生成络合物CTAB-HA，然后离心，取沉淀用氯化钠溶液充分溶解;

步骤2，检测

取溶解后的溶液，采用咔唑显色法检测溶液中葡萄糖醛酸含量，然后计算出透明质酸含量。

若样品为水剂或凝胶，根据样品的粘稠情况进行适当的稀释，然后再加入CTAB-NaOH溶液；若样品为含油的乳剂、油包水膏剂或水包油膏剂，则用水稀释后，震荡混匀并离心分离出水相，再加入CTAB-NaOH溶液。

本发明的特点还在于：