[发明专利]一种悬浮细胞生产重组禽流感病毒灭活疫苗的方法

说明书

本发明涉及一种悬浮细胞生产重组禽流感病毒灭活疫苗的方法，包括：1).驯化种毒和MDCK细胞；2).取经摇瓶培养好的悬浮MDCK细胞，逐步放大培养直至终级反应器；待终级反应器细胞密度达到8.0×10^6.0～1.0×10^7.0个细胞/ml时接入步骤1)中驯化好的病毒进行病毒培养；所述终级反应器为3000L～6000L的生物反应器；3).当CPE达到75％以上时收获病毒液并取样检验病毒质量；将所述病毒液中的病毒纯化浓缩后进行病毒灭活，得到疫苗半成品；4).将所述疫苗半成品乳化处理后得到油乳剂疫苗，经成品质量检验后包装既得疫苗商品。本发明能够流程化地大量、安全、高效、低成本的生产禽流感疫苗。

技术领域

本发明涉及疫苗生产技术领域，具体而言，涉及一种悬浮细胞生产重组禽流感病毒灭活疫苗的方法。

背景技术

禽流感(Avian Influenza，AI)是由正粘病毒科A型流感病毒引起的一种禽类病毒性疾病，被国际兽医局(OIE)确定为类烈性传染病。鸡流感首次报道于1878年(意大利)。1955年证明鸡流感病毒含有甲型流感病毒的核蛋白，为区别于鸡新城疫，又称真性鸡流感或欧洲鸡流感病毒，实际上就是禽流感病毒(AIV)，其所引起的疾病称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。该病毒广泛分布于世界各地，高致病力毒株可引起70％以上的死亡率；禽流感的每一次爆发，都会给养禽业带来巨大的经济损失，现已成为危害全球养殖业的第一大疫病。1997年的香港禽流感事件造成了18人感染，6人死亡。截止到2008年底，共有15个国家393人感染AIV，其中247人死亡。说明AIV有向人类蔓延的趋势，严重威胁公共卫生安全和人类健康，引起世界范围的高度重视，迫切需求切实有效的禽流感疫苗出现。为防止禽流感发生，我国及其他一些国家，采取了给家禽广泛接种灭活疫苗的防制措施。疫苗免疫是预防禽流感疫情的重要措施和有效途径。高致病性禽流感主要由H5和H7亚型引起。除少数病例外，人禽流感主要由H5N1亚型病毒感染所致。为有效控制高致病性禽流感的发生，我国于2005年实施了强制免疫政策，当年就免疫家禽近69亿羽。

我国是世界上的禽类养殖量最大的国家，也是高致病性禽流感的爆发区。今年下半年国家农业部对于禽流感疫苗的免疫做出了新的部署，将H7亚型疫苗纳入强制免疫疫苗的范畴。这就进一步提高了对禽流感疫苗的需求，而本领域目前的重组禽流感病毒灭活疫苗生产工艺还有诸多需要改善的地方。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明涉及一种悬浮细胞生产重组禽流感病毒灭活疫苗的方法，包括：

1).驯化MDCK细胞使其适应全悬浮培养环境；

驯化H5亚型重组禽流感病毒或H7亚型的重组禽流感病毒种毒使得其适应全悬浮培养环境下的MDCK细胞培养；

2).取经摇瓶培养好的悬浮MDCK细胞，接种于1L～7L的生物反应器中进行预培养，随后逐步放大培养直至终级反应器；待终级反应器细胞密度达到8.0×10^6.0～1.0×10^7.0个细胞/ml时接入步骤1)中驯化好的病毒进行病毒培养；

所述终级反应器为3000L～6000L的生物反应器；

3).当CPE达到75％以上时收获病毒液并取样检验病毒质量；

将所述病毒液中的病毒纯化浓缩后进行病毒灭活，得到疫苗半成品；

4).将所述疫苗半成品乳化处理后得到油乳剂疫苗，经成品质量检验后包装既得疫苗商品。

本发明规范了禽流感疫苗的生产规范，能够流程化地大量、安全、高效、低成本的生产禽流感疫苗，应用MDCK细胞培养流感病毒不仅解决了鸡胚蛋白遗留物和外源病毒污染的问题，而且培养的病毒免疫原性更为稳定。

附图说明