[发明专利]MLF1IP基因RNA干扰的方法和试剂盒

说明书

本发明属于生物医药和基因工程领域，涉及一种抑制MLF1IP表达的方法及其相关试剂盒。MLF1IP基因是白血病相关蛋白MLF1的结合蛋白,人肺腺癌组织样本中MLF1IP基因表达显著高于癌旁样本，抑制MLF1IP基因表达能够显著抑制人肺腺癌细胞系A549和H1299的增殖、克隆形成能力。本发明提供了一种抑制MLF1IP表达的方法及其相关试剂盒。利用本发明抑制MLF1IP的表达，方法简单易行，快速高效，成本低廉，为抑制MLF1IP提供了一个简捷的新途径。

技术领域

本发明属于生物医药和基因工程领域，涉及一种抑制MLF1IP表达的方法及其相关试剂盒。

背景技术

MLF1IP基因是作为白血病相关蛋白MLF1的结合蛋白被发现[Hanissian SH,AkbarU, Teng B,et al.cDNA cloning and characterization of a novel gene encodingthe MLF1-interacting protein MLF1IP,Oncogene,2004；20(23):3700-3707]，之后有报道指出，胶质母细胞瘤中MLF1IP的表达异常增高[Hanissian SH,Teng B,Akbar U,et al.Regulation of myeloid leukemia factor-1interacting protein(MLF1IP)expressionin glioblastoma,Brain research,2005；1(1047):56-64]，这提示MFL1IP在肿瘤发生发展中可能扮演重要角色。

对MLF1IP的功能研究则发现MLF1IP是细胞周期和细胞分裂的关键调控因子；MLF1IP是激酶Aurora-B的底物，在Aurora-B的作用下，MLF1IP会发生磷酸化修饰，进而导致着丝粒与微管的结合力下降[Hua S,Wang Z,Jiang K,et al.CENP-U cooperates withHec1to orchestrate kinetochore-microtubule attachment,J Biol Chem,2011；2(286): 1627-1638]。研究还发现，敲除MLF1IP基因会破坏着丝粒与微管的结合引发染色体错位，最终导致有丝分裂缺陷。更为重要的是，在细胞周期G2期，MLF1IP的第78位苏氨酸(T78) 会被PLK1激酶磷酸化，进而形成PLK1-MLF1IP-CENPQ复合物从动粒上解离，这对染色体分离和细胞周期M期的顺利进行非常关键[Kang YH,Park CH,Kim TS,et al.Mammalianpolo-like kinase 1-dependent regulation of the PBIP1-CENP-Q complex atkinetochores, J Biol Chem,2011；22(286):19744-19757]。在Hela细胞中沉默MLF1IP基因会导致PLK1的定位异常和荧光强度减弱，并会破坏染色体分离过程抑制细胞增殖[KangYH,Park JE,Yu LR, et al.Self-regulated Plk1recruitment to kinetochores by thePlk1-PBIP1interaction is critical for proper chromosome segregation,Molecularcell,2006；3(24):409-422]。而PLK1与肿瘤间的相关性早已为众多研究所证实，非小细胞肺癌，黑素瘤，结肠癌和前列腺癌中都有发现PLK1表达的异常增加[Lens SM,Voest EE,Medema RH.Shared and separate functions of polo-like kinases and aurorakinases in cancer,Nature reviews Cancer, 2010；12(10):825-841；Craig SN,WyattMD,McInnes C.Current assessment of polo-like kinases as anti-tumor drugtargets,Expert Opin Drug Dis,2014；7(9):773-789]。PLK1 与MLF1IP间的相互作用关系正是细胞有丝分裂的关键步骤。