[发明专利]高效率的纳米颗粒型双螺旋寡RNA结构体及其制备方法

说明书

本发明申请是基于申请日为2013年1月04日，申请号为201380009937.9(国际申请号为PCT/KR2013/000035)，发明名称为“高效率的纳米颗粒型双螺旋寡RNA结构体及其制备方法”的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种高效率的双链寡RNA结构体，所述双链寡RNA结构体是化学合成的并可有效地用于治疗癌症、传染性疾病等。

为了被有效地递送到细胞中，双链寡RNA结构体可以具有亲水性材料和疏水性材料通过简单的共价键或接头-介导的共价键缀合到双链RNA的两末端的结构，并且可以通过双链寡RNA结构体的疏水相互作用而在水溶液中被转变成纳米颗粒形式。

此外，本发明涉及含有该双链寡RNA结构体的药物组合物，制备该双链寡RNA结构体的方法，以及使用该双链寡RNA结构体来递送双链寡RNA的技术。

背景技术

由于RNA干扰(在下文中称为“RNAi”)的作用已被确认，发现在各种哺乳动物细胞中RNA干扰序列特异性地作用于mRNA(Silence of the transcripts:RNA interference in medicine.J.Mol.Med.,2005,83:764-773)。

当长链双链RNA被递送到细胞中时，被递送的双链RNA转变成小干扰RNA(以下简称为'siRNA')，它被Dicer内切酶加工成21-23个碱基对(bp)。siRNA具有含19-27个碱基的短链双链RNA并且被耦合到RNA诱导的沉默复合体(RISC)，由此导(反义)链识别并降解靶mRNA从而序列特异性地抑制靶基因表达(Nucleic-acid therapeutics:basic principles and recent applications.Nature Reviews Drug Discovery.2002.1,503-514)。

从外部递送的长链双链RNA存在着通过干扰素在哺乳动物细胞的表达而诱发非序列特异性免疫刺激的问题；然而，发现这个问题可以通过短链siRNA来解决(Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells.Nature.2001.411,494-498)来克服。

已知化学合成的siRNA具有约19-27个碱基对的双链并且在3'末端由2nt(核苷酸)悬突结构组成，为了该双链siRNA表达活性，该结构可由3'-羟基基团(OH)和5'-磷酸基团(PO₄)组成(Effect of asymmetric terminal structures of short RNA duplexes on the RNA interference activity and strand selection.Nucleic Acids Res 1October 2008:5812-5821；Strand-specific 5’-O-methylation of siRNA duplexes controls guide strand selection and targeting specificity.RNA 1February 2008:263-274)。

已知商业化的合成的siRNA具有这样的结构，其中羟基基团存在于两末端，并且当合成的siRNA被递送到细胞中时，siRNA的5'末端被磷酸化酶(激酶)磷酸化来表达siRNA的功能(siRNA function in RNAi:A chemical modification analysis.RNA 2003.9:1034-1048)。

Bertrand等人发现，相比于同一靶基因上的反义寡核苷酸(ASO)，siRNA具有显著抑制mRNA在体外和体内表达的作用，并且相应的作用维持很长时间(Comparison of antisense oligonucleotides and siRNAs in cell culture and in vivo.Biochem.Biophys.Res.Commun.2002.296:1000-1004)。