[发明专利]一种检测牡丹花瓣中类黄酮成分的方法

说明书

本发明涉及一种检测牡丹花瓣中类黄酮成分的方法，所述方法包括如下步骤：类黄酮提取液的制备；色谱条件、质谱条件以及二极管阵列检测器的检测波长的设置；采用超高效液相色谱‑二极管阵列检测器‑三重四极杆飞行时间串联质谱联用技术对类黄酮提取液进行检测，获得检测结果；通过分析检测结果，对类黄酮物质进行结构鉴定，推测类黄酮化合物的结构。本发明方法操作步骤简单，检测快速，精确度及灵敏度高，可检测出含量极微的类黄酮成分，鉴定种类全面，在牡丹花瓣中共鉴定出67种主要的黄酮、黄酮醇、黄烷酮和黄烷醇类化合物和5种主要的花青素化合物，填补了牡丹花瓣中类黄酮成分鉴定的空白，对不同品种的牡丹花瓣营养成分的分析具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及一种牡丹花瓣成分的研究方法，尤其涉及一种利用超高效液相色谱-二极管阵列检测器-三重四极杆飞行时间串联质谱联用技术检测牡丹花瓣中类黄酮成分的方法。

背景技术

类黄酮是指基本母核为2-苯基色原酮类化合物，即两个具有酚羟基的苯环通过中央三碳原子相互连接的一系列化合物。依据类黄酮基本分子结构和杂氧环和构象的不同，一般把类黄酮分为六类：黄酮、黄酮醇、异黄酮、黄烷酮、黄烷醇和花青素。类黄酮又称生物类黄酮，是人类饮食中含量最丰富的一类多酚化合物，广泛存在于蔬菜、水果、茶叶以及葡萄当中，对癌症的起始、促进、发展三个主要阶段均有显著抑制作用，相关研究表明，类黄酮例如芹菜素对乳腺癌、结肠癌、黑色素瘤都有很好抑制作用；木犀草素具有抗过敏、抗氧化、抗癌、抗糖尿病等良好的效果；槲皮素具有良好的药用疗效，可以有效地抑制祛痰、止咳和平喘的作用，还能有效的降低血压、血脂、增强抵抗力，尤其对冠心病和高血压患者有辅助治疗的作用。

牡丹是世界著名花卉，不仅具有极高的观赏价值，而且还具有极高的药用价值和食用价值，随着牡丹资源的综合开发和利用，对牡丹花瓣的营养成分和含量进行全面开发和评价，对牡丹产业的发展具有极其重要的理论意义和现实价值。相关研究表明在牡丹花瓣中可能含有各种类黄酮物质，而且可能还含有与其花色相关的花青素。牡丹花瓣中类黄酮物质是综合评价牡丹资源最为重要的一项评价指标，其种类的分析鉴定以及含量测定对于牡丹花资源充分利用是非常必要的。然而，可能是由于牡丹花瓣所含类黄酮成分复杂的缘故，目前对其化学成分的准确与完整鉴定成为研究工作者的一个挑战。

现有技术中，曾采用紫外可见分光光度计(UV)、薄层层析色谱法(TLC)和高效液相色谱仪-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)对不同品种牡丹花瓣的类黄酮成分进行分析，但该方法中类黄酮物质的提取步骤复杂，采用的薄层层析色谱法操作繁琐但准确度并不高；该方法测定出的牡丹花瓣的类黄酮种类有限(参见：孙泽飞.牡丹花类黄酮成分及抗氧化能力分析[D].西北农林科技大学,2015.)。此外，现有技术中曾利用超高效液相色谱-二极管阵列检测器(UPLC-PDA)和超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)对7种牡丹花瓣中类黄酮组分进行了定性和定量分析，但是该方法中类黄酮物质提取步骤复杂，操作时间长，此外，该方法中色谱条件及质谱条件不够优化，检测牡丹花瓣类黄酮成分时，类黄酮用量多但灵敏度不够，仅检测到了牡丹花瓣中15种类黄酮组分，种类不够全面(参见：张宝智,胡永红,韩继刚,等.七个江南牡丹品种花瓣中类黄酮物质分析[J].北方园艺,2013(2):61-65.)。

目前，牡丹花瓣中类黄酮的许多珍贵成分通过现有技术还未能检测出来，能够最全面检测出牡丹花瓣中类黄酮成分的方法还未见报道。

发明内容

本发明的主要目的是获得一种操作方便、精确度高、灵敏度高、检测种类全面的有效检测牡丹花瓣中类黄酮成分的方法，以解决现有技术中存在的如上所述的一个或者多个问题。

本发明提供了一种检测牡丹花瓣中类黄酮成分的方法，所述方法包括如下步骤：