[发明专利]一种检测牡丹花瓣中类黄酮成分的方法

权利要求书

1.一种检测牡丹花瓣中类黄酮成分的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)类黄酮提取液的制备：将牡丹花瓣在冷冻条件下研磨成牡丹花瓣粉末，用醇溶液混匀所述牡丹花瓣粉末，得到含有牡丹花瓣的混合料，然后将所述混合料依次进行超声处理和离心处理，收集上清液并去除沉淀，再将收集的所述上清液通过滤膜过滤除去固体杂质，得到类黄酮提取液；

(2)超高效液相色谱仪的色谱条件、三重四极杆飞行时间串联质谱仪的质谱条件以及二极管阵列检测器的检测波长的设置；所述色谱条件为：流动相：溶剂A为含有0.1％～0.3％体积甲酸的乙腈与水的混合溶液，其中水与乙腈的体积比为(90～95):(10～5)，溶剂B为含有0.1％～0.3％体积甲酸的乙腈溶液；流速为0.2～0.3mL/min；色谱柱温度为30～40℃；进样量为2～4μL；梯度洗脱条件：0～22min，100％溶剂A～72％溶剂A，0％溶剂B～28％溶剂B；22～22.5min，72％溶剂A～60％溶剂A，28％溶剂B～40％溶剂B；22.5～23min，60％溶剂A～0％溶剂A，40％溶剂B～100％溶剂B；23～26.5min，0％溶剂A，100％溶剂B；26.5～27min，0％溶剂A～100％溶剂A，100％溶剂B～0％溶剂B；27～32min，100％溶剂A，0％溶剂B；所述质谱条件为：离子源温度为500～600℃，采用负离子扫描方式；喷雾电压为负压4000V～负压5000V，去簇电压为负压70V～负压90V；雾化气压力为0.3～0.4MPa，辅助雾化气压力为0.3～0.4MPa，气帘气压力为0.2～0.3MPa；采用飞行时间质谱全扫描-信息关联采集-子离子扫描模式，子离子扫描中碰撞电压为负压30eV～负压40eV，碰撞电压差为15～20eV；

(3)采用超高效液相色谱-二极管阵列检测器-三重四极杆飞行时间串联质谱联用技术对类黄酮提取液进行检测，获得检测结果；和

(4)通过分析步骤(3)中获得的检测结果，对类黄酮物质进行结构鉴定，推测类黄酮化合物的结构。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括通过与标准物质和公开数据库对比，进一步确证步骤(4)中推测的类黄酮化合物的结构。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法进一步还包括采用峰面积归一法计算牡丹花瓣中类黄酮各成分的相对含量。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，三重四极杆飞行时间串联质谱仪的质量误差限定范围设置为小于5ppm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的二极管阵列检测器检测波长设置为500～540nm或310～350nm。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述牡丹花瓣的用量为250～350mg；和/或

所述醇溶液为甲醇溶液，所述甲醇溶液的体积浓度为80％～90％，含有1％～3％体积甲酸，用量为900～1000μL。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤(1)中所述超声的时间为20～30min；

步骤(1)中所述离心的速度为11000～13000r/min；

步骤(1)中所述离心的时间为10～20min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述滤膜为直径0.22μm的有机滤膜。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述类黄酮成分包含5种花青素化合物、17种黄酮、43种黄酮醇、5种黄烷酮和2种黄烷醇。