[发明专利]一种造血干细胞及其制备方法和用途

说明书

本发明提供了一种造血干细胞，所述造血干细胞的ZBTB7A基因表达量降低或不表达。本发明采用CRISPR技术对胎儿血红蛋白基因抑制因子进行敲除，操作简便，耗时短；胎儿血红蛋白基因抑制因子‑‑ZBTB7A，在敲除后对有核红细胞的正常功能没有影响，拓展了地中海贫血症的治疗手段；采用病人自体造血干细胞作为移植体，完全避免了移植免疫排斥反应，降低了干细胞治疗风险。

技术领域

本发明涉及一种造血干细胞，具体涉及一种ZBTB7A基因不表达或表达量下降的造血干细胞及其制备方法和用途。

背景技术

2008年WHO全球血红蛋白病流行病学报告指出，在229个国家中约占71％人群存在血红蛋白病这一重大健康问题。在这些国家出生的新生儿占全球新生儿的89％，其中每年超过330000例的新生儿与血红蛋白病有关(其中83％为镰状细胞症，17％为地中海贫血)。5岁以下儿童死亡者中死于血红蛋白病的约占3.4％。

在我国，每年约有56000例重型β-地中海贫血，其中至少有30000例需规范输血才能存活，此外每年还约有5500例重型α-地中海贫血死于围生。我国南方为地中海贫血症的高发地区，各地报道的地中海贫血基因缺陷率为2.5％～20％，而广东和广西两省地中海贫血基因缺陷发生率分别高达10％和20％，两省地中海贫血的病例数占全国总数的2/5以上。若按平均3％的β地中海贫血基因携带率估算，广东省每年出生的重型β地中海贫血新生儿约500例，10年累计约5000例。因此，地中海贫血已经成为广东广西等高发地区的社会性公共卫生问题。我国地中海贫血发病率较高的地区还有海南、贵州、云南、四川、重庆、福建、湖南、湖北、江西等省市。由于多省尚未将地中海贫血筛查纳入婚前和孕妇常规检查项目，基层医务人员对该病认知水平不高，而且近年取消了强制性婚检制度，导致各类出生缺陷率明显上升，每年仍有不少重型地中海贫血患儿出生。仅以深圳市儿童医院为例，2006年新诊断重型β地中海贫血12例，2007年9例。

地中海贫血，是一种珠蛋白基因缺陷而引起的遗传性慢性贫血，以β和α地中海贫血较为常见。目前已发现的α-地中海贫血的基因突变型至少有81种(46种点突变，35种缺失突变)；β地中海贫血基因突变类型至少有186种，主要为点突变。

镰刀型细胞贫血症为常染色体隐性遗传性疾病。主要见于非洲黑人，此外也见于中东、希腊、意大利等地中海沿岸国家，以及印度、印第安人等，还有与上述地区和民族长期通婚的人群，在我国的南方地区也发现有这类病例。杂合子状态者占非洲黑人的20％，美国黑人群的8％，杂合子之间通婚其1/4子女为纯合子，即导致镰刀型贫血症。

镰刀型贫血症患者因β-肽链第6位氨基酸谷氨酸被缬氨酸所代替，构成镰状血红蛋白(HbS)取代了正常Hb(HbA)。在氧分压下降时HbS分子间相互作用，成为溶解度很低的螺旋形多聚体，使红细胞扭曲成镰状细胞(镰变)。临床表现为慢性溶血性贫血、易感染和再发性疼痛危象以致慢性局部缺血导致器官组织损害。该病严重危害母子健康,可使胎儿死亡率达5％,孕妇死亡率达4.62％。

目前对地中海贫血和镰刀型贫血的治疗主要通过以下途径：1，规范性长期输血和去铁治疗；2，造血干细胞移植(一般为异体移植)；3，脾切除术等。造血干细胞移植，是目前唯一能根治地中海贫血和镰刀型贫血的治疗技术，多以骨髓造血干细胞异体移植为主。但是骨髓异体移植由于配型匹配的供体非常稀少，即使配型成功还是难免会产生免疫排斥反应，所以很难大规模应用于临床。