[发明专利]一种八氢番茄红素脱氢酶突变基因及其在类胡萝卜素合成中的应用

权利要求书

1.一种八氢番茄红素脱氢酶突变体基因，其特征在于所述的突变体基因是通过迭代定向进化手段对八氢番茄红素脱氢酶编码基因进行多轮突变，以及一种基于菌落颜色变化的高通量筛选方法，最终获得了八氢番茄红素脱氢酶的突变体基因。

2.根据权利要求1所述的八氢番茄红素脱氢酶突变体基因，其特征在于首先将来源于水生副球菌Agrobacterium aurantiacum的八氢番茄红素脱氢酶编码基因crtI插入解脂耶式酵母整合表达单拷贝载体pINA1269中，然后采用易错PCR技术对crtI进行突变，通过观察番茄红素生产菌株的菌落颜色变化的初筛方法和HPLC方法验证筛选正向突变体，并对目标正向突变体进行测序，获得了八氢番茄红素脱氢酶的突变体基因。

3.一种如权利要求1或2所述八氢番茄红素脱氢酶突变体基因在类胡萝卜素合成中的应用，其特征在于用所述八氢番茄红素脱氢酶突变基因合成番茄红素时，第一轮定向进化获得了A178S突变体，番茄红素产量提高27.3%；进而以该突变体为基础进行定向进化，得到A178S/N280T突变体和A178S/M234I两个突变体，番茄红素产量进一步提高51.4%和18.3%，而将A178S、N280T及M234I组合未能进一步提高番茄红素产量；继续对A178S/N280T突变体进行定向进化，获得A178S/N280T/E239P突变体，番茄红素产量进一步提高40.3%；通过3轮定向进化和筛选，最终获得A178S/N280T/E239P突变体，该突变体将番茄红素产量从3.2mg/g DCW提高到8.7 mg/g DCW，提高了171.9%。