[发明专利]一种结核病检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学免疫学领域，涉及结核病人以及结核杆菌感染的快速特异性检测的方法。具体涉及的是IFNg抗体在抗原特异性TNFa检测试剂盒的应用，特别是在结核病检测中的应用以及新型的结核病检测试剂盒的制作和应用方法。

背景技术

结核病是重要的全球公共卫生问题，严重危害人类健康，每年导致世界上约2百万人的死亡。结核病的早期诊断及有效治疗是结核病防治工作的重中之重，对于控制结核菌传播有着重要的临床意义。目前在临床上对结核病的诊断主要依据临床症状，胸部X光片及细菌学检查，例如结核菌涂片检查虽然简单易行且准确性高，但阳性率低。而结核菌培养检测结果可信度高，但耗时较长，不能满足临床需求。

g-干扰素(IFNg)释放试验分析技术IGRA是一种用于结核杆菌感染的体外免疫检测的新方法。通过定量检测受检者外周血单个核细胞在结核分枝杆菌特异抗原刺激下释放的Y-1FN，从而对潜伏和活动性结核感染进行诊断。其基本原理是：结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，通过结核分枝杆菌特异性重组抗原刺激感染者效应T淋巴细胞增殖，并释放IFNg，通过检测IFNg水平，从而判断其是否具有针对结核分枝杆菌特异性的T细胞反应。该方法不受卡介苗（BCG）及非结核分枝杆菌影响，且其检测灵敏度和特异性均高。特异性好，同时灵敏度高,不受卡介苗接种和环境分枝杆菌的影响。但是，基于g-干扰素释放试验的方法虽然能对结核分枝杆菌感染进行快速诊断，但该方法却不能用于区分活动性与潜伏性结核感染。

结核潜伏感染是指体内存在结核杆菌，无症状且痰中也无结核菌。结核病是指相关出现症状，X检查出现相应表现、曼托试验呈阳性或痰中检出结核菌。活动性结核患者应尽早给予治疗。中国是结核病大国，存在大量的潜伏性结核感染者，这类潜伏性结核感染人群可能终生都没有临床症状，也不需要进行任何治疗。由于g-干扰素释放试验的高灵敏性，除了活动性结核感染者之外，应用此方法检测潜伏性结核感染者也均为阳性，因此给临床用药带来困难。诊断如果能开发出只有活动性结核患者才表现为阳性，而潜伏性结核患者表现为阴性的检测方法，将对我国结核病诊断及治疗具有重要意义。

外周血淋巴细胞受结核特异抗原刺激后产生的细胞因子也包括TNFa，申请公布号为CN103604933A公开基于抗原特异性TNF-a-ELISA检测活动性结核病的试剂盒及其应用，该专利声称基于其试剂盒，可以建立一种区分活动性和潜伏性结核感染的方法，通过ELISA技术定量检测结核特异性抗原ESAT-6和CFP-10刺激条件下外周血单个核细胞释放的TNF-a，以及非刺激情况下外周血单个核细胞释放的本底TNF-a，通过以上两者相减得到抗原特异性TNF-a值，从而对活动性结核病进行直接诊断。但是，业界以及本申请人多次重复该专利的方法并不能够很好的区分潜伏性和活动性结核感染，因此，单一的TNFa释放的指标是否可以作为活动性结核的标志还存在争议。

本申请人利用ESAT-6与CFP-10的蛋白混合液分别对健康人群（Healthy），潜伏感染人群(LTB)，以及活动性结核人群(TB)的外周血单个核细胞样本进行诱导后检测对应人群的TNF-a值，结果参见图1，从图1可见，LTB和TB人群的抗原特异性TNFa值明显高于健康人群，但是LTB和TB人群无显著差异。因此，单一的TNFa释放指标不能区分潜伏性和活动性结核。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种能够区分潜伏性和活动性结核感染的试剂盒及检测方法。

本发明的一个目的是提供一种结核病检测试剂盒，其包括ESAT-6与CFP-10的蛋白混合液和抗人IFNg抗体。

根据一个实施方式，所述的结核病检测试剂盒还包括培养液。

根据一个实施方式，所述的结核病检测试剂盒还包括植物凝集素、人TNFa检测试剂、TNFa蛋白标准品、生物素化的TNFa抗体、链亲核素-藻红蛋白交联物、样品稀释液。

优选地，所述的ESAT-6与CFP-10的蛋白混合液中ESAT-6与CFP-10的浓度分别为9~11微克/毫升。

优选地，所述的抗人IFNg抗体的浓度为0.9~1.1毫克/毫升。

优选地，所述的植物凝集素的浓度分别为9~11微克/毫升。

本发明中，人TNFa检测试剂可以是ELISA试剂，可以化学发光检测试剂，也可以是其他试剂，在我们的优选例中，使用的是来自美国Biolegend的抗TNFa抗体荧光微球。

本发明的第二个目的是提供一种所述的结核病检测试剂盒在检测结核病中的应用。