[发明专利]一种结核病检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种结核病检测试剂盒，其特征在于：其包括ESAT-6与CFP-10的蛋白混合液和抗人IFNg抗体。

2.根据权利要求1所述的结核病检测试剂盒，其特征在于：所述的结核病检测试剂盒还包括培养液。

3.根据权利要求1或2所述的结核病检测试剂盒，其特征在于：所述的结核病检测试剂盒还包括植物凝集素、人TNFa检测试剂、TNFa蛋白标准品、生物素化的TNFa抗体、链亲核素-藻红蛋白交联物、样品稀释液。

4.根据权利要求3所述的结核病检测试剂盒，其特征在于：所述的ESAT-6与CFP-10的蛋白混合液中ESAT-6与CFP-10的浓度分别为9~11微克/毫升；所述的抗人IFNg抗体的浓度为0.9~1.1毫克/毫升；所述的植物凝集素的浓度分别为9~11微克/毫升。

5.一种如权利要求1至4中任一项所述的结核病检测试剂盒在检测结核病中的应用。

6.一种如权利要求1至4中任一项所述的结核病检测试剂盒的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤（1）、向待测样本中加入培养液，得到阴性对照组；

步骤（2）、向待测样本中加入ESAT-6与CFP-10的蛋白混合液，得到第一检测组；

步骤（3）、向待测样本中加入ESAT-6与CFP-10的蛋白混合液以及抗人IFNg抗体，得到第二检测组；

步骤（4）、将所述的阴性对照组、所述的第一检测组和所述的第二检测组分别进行培养、检测得到各组待测样本中的TNFa浓度，其中，所述的阴性对照组的待测样本中的TNFa浓度记为A，所述的第一检测组的待测样本中的TNFa浓度记为B，所述的第二检测组的待测样本中的TNFa浓度记为C；

步骤（5）、计算（B-A）/A的值和（C-B）/A的值，并根据所述的（B-A）/A的值和所述的（C-B）/A的值进行结果的判定。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：步骤（5）中进行结果判定的具体方法为：

当所述的（B-A）/A的值≤1.5时, 则结果判定为阴性无结核感染史；

当所述的（B-A）/A的值>1.5且≤2时，则结果判定为可疑结核感染；

当所述的（C-B）/A的值>2且所述的（B-A）/A的值>2时，且则结果判定为潜伏性结核感染；

当所述的（C-B）/A的值≤-2且所述的（B-A）/A的值>2时，且则结果判定为活动性结核。

8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述的检测方法还包括向待测样本中加入植物凝集素得到阳性对照组，对所述的阳性对照组进行培养、检测得到阳性对照组的待测样本中的TNFa浓度的步骤。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于：当所述的阳性对照组的待测样本中的TNFa浓度>50pg/mL时，则标本符合要求，能够进行检测结果的判定。

10.根据权利要求6或8所述的检测方法，其特征在于：所述检测的具体方法包括依次进行的如下步骤：

步骤（1）、收集各组培养后的上清液，用样品稀释液进行稀释；用样品稀释液将TNFa蛋白标准品稀释至多个浓度梯度；然后分别加入人TNFa检测试剂，在24~26℃下密封混合50~70min；

步骤（2）、真空去除液体；

步骤（3）、加入所述的样品稀释液，继续真空去除液体；

步骤（4）、加入生物素化的TNFa抗体，在24~26℃下密封混合50~70min，然后加入链亲核素-藻红蛋白交联物，继续混合25~35min；

步骤（5）、重复进行步骤（3）；

步骤（6）、加入所述的人TNFa检测试剂并进行悬浮后进行读数；

步骤（7）、通过多个浓度梯度的TNFa蛋白标准品的读数绘制标准曲线，并将各组的读数通过所述的标准曲线换算成各组的待测样本的TNFa浓度。