[发明专利]一种液体发酵及配方剂型制备多粘类芽孢杆菌生物农药可湿性粉剂的方法有效
| 申请号： | 201711160746.9 | 申请日： | 2017-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN108244140B | 公开（公告）日： | 2020-10-23 |
| 发明（设计）人： | 陈晨;旷文丰;许滢;陈娟;吴紫燕;毛伟力 | 申请（专利权）人： | 上海万力华生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A01N63/25 | 分类号： | A01N63/25;A01N25/14;A01P3/00 |
| 代理公司： | 上海申新律师事务所 31272 | 代理人： | 竺路玲 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新区张*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 液体 发酵 配方 剂型 制备 多粘类 芽孢 杆菌 生物农药 可湿性粉剂 方法 | ||
本发明公开了一种液体发酵及配方剂型制备多粘类芽孢杆菌生物农药可湿性粉剂的方法，其所采用的多粘类芽孢杆菌发酵液，解决了传统液体发酵芽孢转化率低的问题，芽孢转化率超过98％；且本发明生产的多粘类芽孢杆菌发酵液为活性多粘芽孢菌体，抵御外界不良环境能力强，寿命长，因此可长时间储存，货架期长，发酵工艺适合于产业化生产；以及该多粘类芽孢杆菌母药与多粘类芽孢杆菌生物农药可湿性粉剂的生产配制方法，工艺简单，芽孢回收率达到98％以上，采用多种芽孢保护工艺，使产品货架期超过18个月，具有商业运用价值。
技术领域
本发明涉及一种制备生物农药的方法，尤其涉及一种液体发酵及配方剂型制备多粘类芽孢杆菌生物农药可湿性粉剂的方法。
背景技术
植物病害是制约植物安全生长的主要障碍之一，目前防治方法主要是喷施化学药剂。蔬菜作物生长期短，频繁使用化学药剂存在农药残留的风险，研制和使用生物农药能减少化学药剂的使用量。对植物病原菌具有拮抗作用的微生物是研制生物农药的主要来源，这类微生物种类繁多、分布广泛，即使同一种微生物由于分布于不同地区，其拮抗作用强弱或机制也有一定差异。挖掘生防微生物资源，首先是用目标病菌广泛筛选拮抗菌，这是生物防治研究领域的基础工作。
多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)是芽孢杆菌科(Bacillaceae)类芽孢杆菌属(Paenibacillus)的革兰氏阳性细菌，在划入类芽孢杆菌属(Paenibacillus)之前又称Bacilluspolymyxa。多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)的细胞呈杆状，(0.5-2.5)μmX(1.2～10.0)μm，G+C含量为40％～50％；利用周生鞭毛运动，在膨大孢子囊中产生椭圆型芽孢；最适生长pH为7，最适温度为28～30℃；兼性厌氧，分解葡萄糖和其他糖类产酸，有时产气，在营养琼脂上无可溶性色素，应用前景广阔。
传统农业中化学农药的过量使用不仅会增加农药残留量，同时导致了许多作物病虫害的抗药性，并对土壤、水体及生态环境造成污染。随着社会的进步，人们生活水平的提高，对食品安全的意识不断加强，在这种情况下应用高效、广谱、安全、无毒的有益微生物进行植物疫病的防治越来越受到人们的重视。多粘类芽孢杆菌产生的多肽类抗菌物质对植物病原真菌具有很好的拮抗活性，且性质比较稳定，可用于多种植物病害的生物防治。因此，多粘类芽孢杆菌是一类极具开发前景和应用价值的生防细菌。
目前国内对多粘类芽孢杆菌的研究主要集中在菌种的筛选、分离鉴定、抑菌效果以及对发酵液化学成分的分析，而对于多粘类芽孢杆菌的发酵培养方面还罕见报道。
发明内容
本发明为解决现有技术中的上述问题，提出一种液体发酵及配方剂型制备多粘类芽孢杆菌生物农药可湿性粉剂的方法。
本发明提供了一种液体发酵制备多粘芽孢杆菌生物农药的方法，相对于现有的液体发酵技术生产的多粘类芽孢杆菌制剂，本发明生产的多粘芽孢的活性孢子粉，产品货架期长而且工艺简单、设备投资小。
同时本发明提供了一种新的液体发酵培养液，解决了传统液体发酵芽孢转化率低的问题。该培养基包括了碳源、氮源、无机盐，其中所述碳源选自可溶性淀粉、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、玉米淀粉中的一种或多种；所述氮源选自豆饼粉、大豆粉、棉籽饼粉、酵母膏中的一种或多种；所述无机盐包含磷酸氢二钾、硫酸镁、碳酸钙、氯化钠中的一种或多种。
此外，本发明还提供了一种采用上述方法制备的多粘芽孢杆菌生物农药可湿性粉剂。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明的第一个方面是提供一种多粘类芽孢杆菌发酵液的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤11，将菌种接于培养基中，恒温培养；
步骤12，将培养后的菌种转移至培养液进行摇瓶培养，得到一级种子液；
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