[发明专利]一种能逆转肿瘤多药耐药性的茯苓提取物的制备

说明书

本发明公开了一种茯苓提取物，该茯苓提取物中茯苓三萜含量为40％‑90％，通过如下方法制备获得：将茯苓粉碎，加入适量乙醇溶液，加热条件下提取，抽滤，得滤液，合并滤液，浓缩，加入少量水，乙酸乙酯萃取多次，减压干燥后，甲醇溶解，过滤，滤液减压浓缩，冷冻干燥，得到固态茯苓提取物。本发明制备的茯苓提取物源于传统中药，体外实验显示该提取物具有抗肿瘤的活性，并能逆转MCF/ADR的多药耐药性。

技术领域

本发明涉及一种具有逆转肿瘤多药耐药性的茯苓提取物，其制备方法及应用。

背景技术

恶性肿瘤是恶性肿瘤是危害人类健康的主要疾病之一，而且发病率和病死率仍然呈现不断上升的趋势。手术、化疗与放疗是目前最常用的治疗手段，单一的化疗药物已经不能满足需要，联合用药已经成为治疗肿瘤的必然趋势。近年来发现中药中很多活性物质均具有抗肿瘤的作用，在临床上也具有一定的效果。目前，恶性肿瘤的死亡有94％与肿瘤的多药耐药性产生有关，寻求高效低毒的逆转肿瘤多药耐药的方法已经成为研究热点。

肿瘤多药耐药性(MDR)是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性的同时，对结构和作用机制完全不一样的其他抗肿瘤药物产生交叉耐药性的现象。MDR产生的机制主要有：①膜蛋白介导的MDR，包括P-g糖蛋白介导的经典MDR理论，多药耐药相关蛋白介导的MDR，乳腺癌耐药蛋白介导的MDR，肺耐药相关蛋白介导的MDR等；②酶介导的MDR，包括：谷胱甘肽S转移酶介导的MDR，拓扑异构酶II介导的MDR，蛋白激酶C介导的MDR等；③凋亡调控基因介导的MDR，包括bcl 2基因介导的MDR，p53基因等；④DNA异常修复引起的MDR。肿瘤的多药耐药性产生的原因比较复杂，天然药物具有低毒、资源丰富、作用靶点多等特点。近年来，许多学者发现中药中含有多种逆转多药耐药的成份。

茯苓为多孔科真菌茯苓Poria cocos(schw)Wolf的干燥菌核，其味甘、淡、平。具有利水渗湿、健脾、宁心的功能，主治水肿尿少，脾虚食少，便溏泄泻，心神不宁等症。茯苓中主要成分为茯苓多糖与茯苓三萜，其中茯苓多糖研究较多，而茯苓三萜主要有自由基清除功能，抗菌，抗炎，以及抗肿瘤等作用。经研究发现茯苓乙醇提取物能通过激活线粒体caspase通路抑制A549细胞的增殖，主要是通过降低线粒体膜电位，并释放细胞色素C进入胞质溶胶，将caspase前体物裂解成caspase-9，从而达到抑制作用。并研究了茯苓乙醇提取物中一种叫土莫酸的成份，发现它是产生细胞毒性的主要成份。并指出茯苓提取物可以抑制非小细胞肺癌。且茯苓中的成份茯苓酸能触发对吉西他滨具有耐药性的PANC-1和MIA PaCa-2胰腺癌细胞的凋亡。通过基因对比分析发现茯苓酸能激活热休克反应与展开蛋白反应相关基因从而引发内质网应激反应，即通过增加XBP-1s，ATF4，Hsp70，CHOP and phospho-eIF2 α的表达。同时，体内实验显示25mg/kg的PA能通过引起肿瘤组织部位的细胞凋亡与内质网应激相关蛋白的表达从而显著抑制MIA PaCa-2肿瘤的生长且没有毒性。

茯苓中含有的三萜成份较多，目前对其提取技术有一定的报道。三萜成份大多数为脂溶性成份，故有机溶剂提取方法居多。本发明用乙醇溶液提取，采用乙酸乙酯萃取，甲醇过滤后得到一种具有一定的抗肿瘤活性并逆转肿瘤多药耐药性的三萜类提取物。

发明内容

本发明的目的是提供一种茯苓三萜提取物，尤其是甲醇提取物；

本发明的另一目的是提供一种茯苓三萜提取物的制备方法；

本发明还有一个目的是提供上述茯苓三萜提取物在逆转肿瘤多药耐药方面的用途。

本发明的实现过程如下：

一种茯苓三萜提取物，其通过以下步骤得到：将茯苓粉碎，加入4-15倍体积的提取溶液，提取溶液浓度为50％-90％，50-110℃加热条件下提取1-4次，每次提取时长为1-5h，抽滤，合并滤液，加入适量水分散后用乙酸乙酯进行萃取2-5次，浓缩干燥，甲醇溶解过滤，进一步浓缩，用水分散并干燥得到含有茯苓酸与去氢土莫酸的茯苓三萜提取物。