[发明专利]一种用于骨髓间充质干细胞移植的干细胞保存液

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及细胞保存液，具体涉及干细胞保存液，特别地，涉及骨髓间充质干细胞保存液。

背景技术

干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞，具有不断自我繁殖的能力。目前，干细胞研究主要集中在成体干细胞、胚胎干细胞、诱导性多能干细胞。间充质干细胞是一类中胚层来源的有多向分化能力的干细胞，广泛存在于全身各种组织中。因其具有极低的免疫原性和较强的免疫调节能力，间充质干细胞在造血重建、免疫治疗和组织修复等领域具有非常广阔的临床应用前景。其中，骨髓间充质干细胞因易获取、损伤小等特点被广泛应用。

目前，国内能实现人骨髓间充质干细胞分离并大规模培养的医疗机构非常少。鉴于骨髓间充质干细胞广泛的临床用途，骨髓间充质干细胞保存液的研究至关重要，甚至决定着干细胞的应用推广和治疗效果。

临床上骨髓间充质干细胞自患者体内取出后经分离试剂盒处理，与生理盐水混合后必须立即输回体内，不能长期保存。实验研究中常规的细胞保存液含有DMSO，即二甲基亚砜，是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶形成，减少自由基对细胞的损害。

但DMSO存在一定的毒性作用，可与蛋白质疏水基团发生作用，导致蛋白质变性，具有血管毒性和肝肾毒性。用含DMSO 的保存液保存细胞时，要求超低温保存。并且，移植前要先复温至37℃并通过离心去除细胞保存液，获得的细胞沉淀再用生理盐水重悬输入受者体内。这一过程增加了细胞污染的可能性，同时细胞的活力也受到破坏。

因此亟需一种低毒性骨髓间充质干细胞保存液，并且，在所述保存液中，干细胞不需要超低温保存，低温即可。

发明内容

为了克服上述问题，本发明人进行了锐意研究，采用血浆、磷酸二氢钾、低分子量肝素钠和腺苷为主要成分的干细胞保存液，其中，血浆可维持细胞正常活性，低分子量肝素钠可用来抑制骨髓间充质干细胞粘附，磷酸二氢钾为细胞提供稳定的外环境支持，腺苷可促进细胞的自我修复能力，发挥保护作用，从而完成本发明。

本发明的一方面在于提供一种用于骨髓间充质干细胞移植的干细胞保存液，具体体现在以下几个方面：

(1)一种用于骨髓间充质干细胞移植的干细胞保存液，其中，所述干细胞保存液包括血浆、低分子量肝素钠、磷酸氢二钾溶液和腺苷。

(2)根据上述(1)所述的干细胞保存液，其中，所述干细胞保存液包括100％血浆、400～700U/mL低分子量肝素钠、 40～70mmol/L磷酸氢二钾溶液和0.4～10μmol/L腺苷。

(3)根据上述(1)或(2)所述的干细胞保存液，其中，所述干细胞保存液包括100％血浆、500～600U/mL低分子量肝素钠、终浓度为50～60mmol/L磷酸氢二钾溶液和2～10μmol/L 腺苷；

优选地，所述干细胞保存液包括100％血浆、550～600U/mL 低分子量肝素钠、终浓度为55～60mmol/L磷酸氢二钾溶液和5～10μmol/L腺苷，优选10μmol/L腺苷。

(4)根据上述(1)至(3)之一所述的干细胞保存液，其中，

所述血浆优选与骨髓间充质干细胞同源；和/或

所述低分子量肝素钠的分子量为400～600Da；和/或

所述磷酸氢二钾溶液的内毒素含量<5EU/mL；和/或

所述腺苷的内毒素含量<5EU/mL。

(5)根据上述(1)至(4)之一所述的干细胞保存液，其中，所述干细胞保存液还包括表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG)。

(6)根据上述(1)至(5)之一所述的干细胞保存液，其中，所述表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的用量为1～20 mg/mL，优选为5～10mg/mL。

(7)根据上述(1)至(6)之一所述的干细胞保存液，其中，所述干细胞保存液还包括非渗透性低温保护剂；

优选地，所述非渗透性低温保护剂选自海藻糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、聚合物羟乙基淀粉和聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种；

更优选地，所述非渗透性低温保护剂选自海藻糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇和聚合物羟乙基淀粉中的一种或几种，例如海藻糖和/或甘露醇。

(8)根据上述(1)至(7)之一所述的干细胞保存液，其中，所述非渗透性低温保护剂的用量为1～10mg/mL，优选为2～8mg/mL，更优选为4～6mg/mL。

(9)根据上述(1)至(8)之一所述的干细胞保存液，其中，所述干细胞保存液还包括人参皂苷Rb1。