[发明专利]一种TaqMan‑MGB探针法检测人类TPMT基因多态性的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种TaqMan-MGB探针法检测人类TPMT基因多态性的引物，其特征在于，包括如下核酸序列：

(1)扩增TPMT基因rs1142345多态性位点的引物对，其核苷酸序列SEQ ID NO.：1和SEQ ID NO.：2所示；

(2)用于检测TPMT基因rs1142345多态性位点的TaqMan-MGB探针，其核苷酸序列SEQ ID NO.：3和SEQ ID NO.：4所示，其中SEQ ID NO.：3在5末端标记Fam信号，SEQ ID NO.：4在5末端标记VIC信号；

上述引物对和荧光探针对在一次检测中共同使用。

2.一种权利要求1所述的TaqMan-MGB探针法检测人类TPMT基因多态性的引物在检测TPMT基因多态性中的应用。

3.一种TaqMan-MGB探针法用于检测人类TPMT基因多态性的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括权利要求1所述的引物和探针，以及2x PCR反应混合液，阳性标准品。

4.一种权利要求3所述的TaqMan-MGB探针法用于检测人类TPMT基因多态性的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取人外周血基因组DNA；

(2)分别以提取的人外周血基因组DNA和阳性标准品为模板、权利要求1和2中的引物、探针、PCR反应混合液，进行实时荧光定量PCR反应；

(3)根据检测到的荧光信号值对rs1142345位点进行基因型判定。

5.根据权利要求4所述的TaqMan-MGB探针法用于检测人类TPMT基因多态性的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(2)中，实时荧光定量PCR反应的扩增体系为：总体积20μL，2x PCR反应混合液10uL，SEQ ID NO.：1 0.2uM，SEQ ID NO.：2，0.2uM，SEQ ID NO.：3 0.2uM，SEQ ID NO.：4 0.2uM，模板DNA 50ng。

6.根据权利要求4所述的TaqMan-MGB探针法用于检测人类TPMT基因多态性的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(2)中，实时荧光定量PCR反应中的扩增程序为：95℃，2min；95℃，5s，60℃，45s，收集荧光，40个循环。