[发明专利]一种用于HLA-DRB1*03基因定性检测的PCR扩增引物及试剂盒

说明书

本发明涉及一种可用于临床检测的基因检测方法及试剂盒，本方法针对HLA‑DRB1*03低分辨型基因，能够实现准确、快速、简便、廉价的检测，可为复发性喉乳头瘤等临床相关疾病的治疗及预后提供重要信息。

技术领域

本发明属于基因诊断领域，涉及一种基因检测的方法及试剂盒，以及在临床相关疾病中的应用。

技术背景

复发性呼吸道乳头状瘤病(recurrent respiratory papilloma，RRP)是喉部上皮组织最常见的良性肿瘤，主要病原为人乳头状瘤病毒6和11亚型。反复切除是该病主要的治疗手段，但不能阻止复发。在疾病活动期，多数患者可能每2-3个月就需要接受一次手术，有的患儿一生甚至要接受上百次手术，为患者及家庭带来了沉重的负担。另外，RRP的频繁复发，增加了病灶向下呼吸道播散的可能，进而使疾病变得更具侵袭性。

目前尚没有有效的治愈RRP的手段，但已先后开发出多种药物用于辅助治疗，在降低手术次数、减少手术间隔时间等方面表现了较好的效果，但也存在一定的不良反应。目前尚没有有效的可预测RRP患者复发次数及复发间隔的指标，难以满足临床需要。由于临床医师不能预先判定疾病的复发频度以及侵袭性，以及对药物不良反应的顾虑，很难决定针对某个患者是否采用药物辅助治疗。因此，准确并尽早判定患者的病情，对易复发患者及难治性患者及时给予药物辅助治疗以降低复发次数和恶变风险，而对复发次数较少的患者仅采用单纯的手术治疗以避免药物治疗的不良反应，具有重要的临床价值和社会意义。

国外多个针对高加索人和美国黑人的研究表明，RRP的发病及严重程度与HLA-DRB1*03 型存在高度的相关性。首先，HLA-DRB1*03在RRP患者中的频率显著高于对照人群中的频率；其次，重症RRP患者的HLA-DRB1*03基因频率显著高于轻症RRP患者。本发明人所在课题组的研究也表明，我国RRP患者同样表现显著高的HLA-DRB1*03型(03:01亚型) 频率，而且HLA-DRB1*03亚型与RRP的严重程度具有显著的正相关性。因此，通过检测 RRP患者是否具有HLA-DRB1*03亚型基因，可提前预测RRP患者的疾病严重程度，并可用于RRP的指导治疗，具有重要的临床价值。而目前临床尚无开展该项检测，截止本专利申请日尚未检索到类似的专利申请。

HLA(Human leukocyte antigen,人类白细胞抗原)是人类的主要组织相容性系统，在细胞免疫中发挥重要作用。HLA基因复合体位于人类第6号染色体，具有高度的多态性，是目前所知人体最复杂的多态系统。针对HLA的基因分型已广泛应用于器官和细胞移植、疾病关联研究等。根据序列的差异大小，HLA各基因可分为不同的型和亚型。根据分辨率的不同， HLA各基因的分型还可采用高分辨率分型和低分辨率分型两种分辨率。具有相同低分辨率型的特定HLA分子具有相同的空间结构和高度相似的氨基酸序列，而具有相同高分辨率亚型的特定HLA分子具有相同的空间结构和完全相同的氨基酸序列。目前针对HLA基因的分型方法主要包括PCR-SSP(PCR序列特异性引物法)、PCR-SSOP(PCR序列特异性寡核苷酸探针法)、测序法和流式检测法等。这些方法均是针对全部或特定HLA基因的所有可能型或亚型的全面性检测方法。如果基于临床特定疾病的需要，仅仅检测受试者是否为某种特定HLA基因的亚型(例如单纯检测受试者是否为HLA-DRB1*03亚型)，上述方法显得昂贵而费时，难以满足临床的需求。