[发明专利]一种同时检测尿液中四个膀胱癌标志物的蛋白芯片

说明书

本发明一种同时检测尿液中四个膀胱癌标志物的蛋白芯片，属于借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料技术领域。所述蛋白芯片为同时含有NMP22微球、BTA微球、CD20微球和TERT微球的蛋白芯片；所述NMP22微球、BTA微球、CD20微球和TERT微球由嵌入了量子点的胶体金包被微球和分别与之偶联的NMP22单克隆抗体、BTA单克隆抗体、CD20单克隆抗体和TERT单克隆抗体组成。本发明具有以下优点：能同时针对特异性高的NMP22、BTA、CD20及TERT，进行膀胱癌的早期检测和复发检测；芯片检测手段快速，省时省力，适合临床广泛应用。

技术领域

本发明属于借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料技术领域，具体涉及一种同时检测尿液中四个膀胱癌标志物的蛋白芯片。

背景技术

膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤，我国男性膀胱癌的发病率有逐年上升且年轻化的趋势。虽然近年来膀胱癌的诊断和治疗技术有很大的进步，但是膀胱癌的死亡率仍居高不下。膀胱癌目前缺乏有效的治疗靶点和手术后评估指标，约5％～50％患者术后发生复发或转移。

目前膀胱癌诊断，尤其是术后复发的监测，主要以尿脱落细胞学检查与尿道膀胱镜检查为主。然而，膀胱镜检查具有侵入性，操作不便，患者较痛苦，还有感染、出血等风险，而且检测费用昂贵。尿脱落细胞学检查特异性好但敏感性低，容易受到尿路感染等因素的干扰。因此这两种检查方法在临床应用上都受到一定限制。

近年来，国内外学者开始致力于从尿液中寻找敏感、特异、可靠、有效的膀胱癌生物标记物并建立无创伤性检查和发明方法来提高膀胱癌早期诊断率。

以往对尿液中肿瘤标志物的检测，一般采用PCR、ELISA、免疫层析荧光标记等方法。PCR和ELISA法需要对尿液进行预处理来提取核酸和蛋白质，不适用于快速检测，免疫层析法虽然快速，但是假阴性的比例大，只能定性或半定量，其特异性和灵敏度有待提升。因此，需要结合新方法新技术新材料开发新型膀胱癌尿液早期检测的手段，提高对膀胱癌诊断的特异性和敏感性。

发明内容

核基质蛋白NMP22(NuMA)是组成细胞核内部结构的支架,而且同DNA复制、RNA合成、激素联接、基因表达调控密切相关。膀胱癌时大量肿瘤细胞凋亡并将NMP22释放入尿，使其水平可增高25倍。以10kU/mL为临界时，它对膀胱癌诊断的敏感度为69.7％，特异度为78.5％，对浸润性膀胱癌诊断的敏感度为100％。以尿液NMP22水平10U/mL为临界值，诊断膀胱移行细胞癌的敏感性为88.3％，特异性为84.0％。以6.4U/mL为临界值，诊断尿路上皮癌的敏感性为84.6％，特异性为74.2％，与尿细胞学检查联合检测敏感性可以增加至91％。尿NMP22作为尿路上皮癌的肿瘤标记物具有较高的特异性，并可在一定程度上反应肿瘤的恶性程度和预后。

膀胱肿瘤抗原(bladder tumor anti-gen，BTA)是由膀胱肿瘤分泌的蛋白水解酶，将膀胱基底膜降解为IV型胶原、纤维蛋白连接素和层粘连蛋白，随尿液排出所形成的基底膜复合物。这一类降解产物的成分主要为分子量(16～165)×10³的特异多肽。在经膀胱镜和病理活检确诊的膀胱癌患者中，BTA的敏感度为67％，特异度为78％，准确度为73％，阳性预测值为70％，阴性预测值为75％，其敏感度有随膀胱癌的分期升高而升高的趋势[谢克基，膀胱肿瘤抗原检测膀胱癌的临床价值]。可作为膀胱癌患者尿液检测的定性指标之一。