[发明专利]一种同时检测尿液中四个膀胱癌标志物的蛋白芯片

权利要求书

1.一种同时检测尿液中四个膀胱癌标志物的蛋白芯片，其特征在于：所述蛋白芯片为同时含有NMP22微球、BTA微球、CD20微球和TERT微球的蛋白芯片；

所述NMP22微球由嵌入了量子点的胶体金包被微球和与之偶联的NMP22单克隆抗体组成；

所述BTA微球由嵌入了量子点的胶体金包被微球和与之偶联的BTA单克隆抗体组成；

所述CD20微球由嵌入了量子点的胶体金包被微球和与之偶联的CD20单克隆抗体组成；

所述TERT微球由嵌入了量子点的胶体金包被微球和与之偶联的TERT单克隆抗体组成。

2.一种同时检测尿液中四个膀胱癌标志物的蛋白芯片，所述蛋白芯片通过下述方法制备：

(一)、胶体金包被原微球的制备及量子点的嵌入；所述量子点具有同一激发波长但发射波长互不相同；

(二)、以NMP22、BTA、CD20和TERT的重组蛋白作为抗原分别制备单克隆抗体；单克隆抗体分别与嵌入量子点的胶体金包被的原微球的偶联，得到NMP22微球溶液、BTA微球溶液、CD20微球溶液和TERT微球溶液；

(三)、分别取NMP22微球溶液、BTA微球溶液、CD20微球溶液和TERT微球溶液，在电磁搅拌仪的持续搅拌下充分混匀，即得同时检测尿液中四个膀胱癌标志物的蛋白芯片。

3.根据权利要求2所述的一种同时检测尿液中四个膀胱癌标志物的蛋白芯片，其特征在于，所述步骤(一)胶体金包被原微球的制备及量子点的嵌入的具体过程为：

(1)、胶体金的制备；

(2)、胶体金包被原微球：在离心管中加入步骤(1)制备所得的胶体金和0.05g微球，充分振荡混匀后离心，弃去上层液体，沉淀反复用蒸馏水和无水乙醇洗涤后，在室温下干燥后获得胶体金包被的原微球；

(3)、将量子点嵌入胶体金包被原微球：取玻璃试管，分别加入2mL量子点氯仿溶液和0.01g步骤(2)制备所得的胶体金包被的原微球，充分振荡至溶液中几乎不存在游离的量子点，于通风橱中待氯仿挥发完全后，将剩下的微球用无水乙醇反复洗涤，在室温下干燥后获得在嵌入了量子点的胶体金包被微球。

4.根据权利要求2或3所述的一种同时检测尿液中四个膀胱癌标志物的蛋白芯片，其特征在于，胶体金制备的具体过程为：将氯金酸配置成0.01％的水溶液，取100mL至250mL烧杯中，加热至沸腾后，保持沸腾的状态下加入柠檬酸钠，当氯金酸水溶液的颜色为稳定的红色后停止加热，待红色水溶液冷却至室温后，用蒸馏水恢复至原体积，即得。

5.根据权利要求2所述的一种同时检测尿液中四个膀胱癌标志物的蛋白芯片，其特征在于，所述步骤(二)中单克隆抗体分别与嵌入量子点的胶体金包被的原微球的偶联的具体过程为：

(a)、对溶于磷酸缓冲液中的NMP22、BTA、CD20和TERT单克隆抗体，分别进行下述处理：在电磁搅拌仪的持续搅拌下稀释成浓度为30ug/mL的溶液；

(b)、往步骤(a)中再依次加入1％的吐温80、0.01g步骤(3)中制备所得的嵌入量子点的胶体金包被的原微球，持续搅拌15min后，加入5％的BSA溶液封闭微球上没有偶联完的位点，待封闭完成后，对溶液进行离心，取沉淀用PBS缓冲液反复洗涤后，分别得到偶联了NMP22单克隆抗体的NMP22微球、偶联了BTA单克隆抗体的BTA微球，偶联了CD40单克隆抗体的CD20微球和偶联了TERT单克隆抗体的TERT微球。