[发明专利]一种用于检测油菜茎基溃疡病菌的LAMP‑HNB引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于检测油菜茎基溃疡病菌的LAMP-HNB引物组，其特征在于，所述LAMP-HNB引物组包括外引物对和内引物对，所述的外引物对为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述的内引物对为SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。

2.权利要求1所述的LAMP-HNB引物组在检测油菜茎基溃疡病菌或制备检测油菜茎基溃疡病菌的产品中的应用。

3.一种用于检测油菜茎基溃疡病菌的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括权利要求1中所述的LAMP-HNB引物组。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括指示剂；

任选的，所述的指示剂为羟基萘酚蓝；

任选的，所述的羟基萘酚蓝为来自Sigma公司的货号为H991331试剂盒中的试剂；

任选的，还包括DNA聚合酶；

任选的，所述的DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶；

任选的，所述的Bst DNA聚合酶为来自NEB公司的货号为M0538S试剂盒中的试剂；

任选的，还包括等温扩增反应缓冲液、dNTPs、含有Mg²⁺的可溶性化合物；

任选的，所述的含有Mg²⁺的可溶性化合物为MgSO₄；

任选的，所述等温扩增反应缓冲液、MgSO₄为来自NEB公司的货号为M0538S试剂盒中的试剂；

任选的，还包括阳性对照；

任选的，还包括阴性对照；

任选的，还包括核酸提取试剂；

任选的，所述的核酸提取试剂为天根生化科技有限公司的货号为DP305的DNA提取试剂盒中的试剂。

5.权利要求3或4所述的试剂盒在检测油菜茎基溃疡病菌或含有油菜茎基溃疡病菌核酸样品中的应用。

6.一种用于检测样本中的油菜茎基溃疡病菌或油菜茎基溃疡病菌核酸的方法，其特征在于，所述的方法包括使用权利要求1中LAMP-HNB引物组或权利要求3-4中任一项所述的试剂盒的步骤。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括获得样本核酸的步骤；

任选的，所述的核酸为DNA或者RNA；

任选的，所述的DNA是通过采用天根生化科技(北京)有限公司的货号为DP305的DNA提取试剂盒中的方法获得；

任选的，当所述的核酸为RNA时，还包括RNA反转录为cDNA的步骤。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括在检测样本核酸中加入LAMP-HNB反应试剂进行LAMP-HNB扩增反应的步骤；

任选的，所述的LAMP-HNB反应试剂包括DNA聚合酶、等温扩增反应缓冲液、dNTPs和含有Mg²⁺的可溶性化合物；

任选的，所述的含有Mg²⁺的可溶性化合物为MgSO4；

任选的，所述等温扩增反应缓冲液、MgSO₄为来自NEB公司的货号为M0538S试剂盒中的试剂；

任选的，所述的DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶；

任选的，所述的Bst DNA聚合酶为来自NEB公司的货号为M0538S试剂盒中的试剂；

任选的，所述的方法还包括LAMP-HNB扩增反应前加入指示剂的步骤；

任选的，所述的指示剂为羟基萘酚蓝；

任选的，所述的羟基萘酚蓝为来自Sigma公司的货号为H991331试剂盒中的试剂；

任选的，所述外引物对的上下游引物分别设为F3和B3，所述的内引物对的上下游引物分别设为FIP和BIP，四种引物在LAMP-HNB扩增反应体系中的终浓度关系为：([F3]＝[B3]):([FIP]＝[BIP])＝1:8；

任选的，所述的四种引物在LAMP-HNB扩增反应体系中的终浓度分别为[F3]＝[B3]＝0.2μmol/L，[FIP]＝[BIP]＝1.6μmol/L；

任选的，所述的羟基萘酚蓝的在LAMP-HNB扩增反应体系中的终浓度为150μmol/L。