[发明专利]用于活动性肺结核无创诊断的外周血环状RNA标记物及应用

说明书

本发明公开了用于活动性肺结核无创诊断的外周血环状RNA标记物，并且根据该外周血环状RNA标记物设计引物，所设计的引物可用于制备活动性肺结核的无创诊断试剂盒。本发明可有效区分肺结核患者与健康人群，其检测方便、无创、准确性高、稳定性好，适于推广使用。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，具体地说，涉及用于活动性肺结核无创诊断的外周血环状RNA标记物及应用。

背景技术

结核病是严重危害人类健康的疾病之一，结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)是结核病的病原体。虽然自2000年以来，结核病的发病率、流行率和死亡率都有所下降，但据世界卫生组织(WHO)估计，2015年全球人口中仍有约150万的死亡病例和1050万的新发结核病病例，其中得到准确筛查和报道的病例尚不到63％。而中国是全球结核病高负担国家之一，结核病患者数量位列全球第三，大约占全球结核病患者总量的百分之十。

目前，活动性肺结核诊断方法大多采用痰涂片检查法，该方法虽然简单易行，但检出率仅不到50％；并且痰结核杆菌的培养耗时长，容易导致患者错过最佳治疗期；另外，痰涂片检测方法对于医务工作者而言也存在一定的感染风险。作为结核病防治的重点，结核病的早期诊断已经成为一个临床上的重要问题之一。目前，迫切需要在现有细菌检测等常规技术之外开发一种快速低成本的无创诊断方法，能够区分早期活动性肺结核与健康人群。

对外周血中的核酸或蛋白质的检测为临床提供了一种很好的无创检测技术，具有较好的应用前景。近期一些研究表明，血液中的转录组标记物可用于区分活动性肺结核以及健康个体，并用于肺结核发病风险的预测；该方法具有易操作、检测成本低和所检测信号背景噪声小等优势，但外周血中mRNA转录产物的表达可能会受到血液采集过程的影响，使得该方法的稳定性和可重复性有待进一步验证，从而限制了其临床转化进程。此外，还有研究通过定量检测血液中结核分枝杆菌抗原多肽的方法对活动性肺结核进行诊断以及治疗监测，但是由于血液中的循环细菌抗原过于微量，在疾病初期很难检测出来，因此大大影响该检测方法的敏感性和临床应用性。因此，亟待从外周血中寻找一种新的标记物用于肺结核病的早期诊断和疗效跟踪。

发明内容

基于现有技术的不足，本发明提供了一种用于活动性肺结核无创诊断的外周血环状RNA标记物。作为新发现的内源性非编码RNA(noncoding RNA，ncRNA)，环状RNA(circularRNA，circRNA)不具有5'末端帽子和3'末端尾巴，在真核细胞中大量稳定存在。本发明充分利用外周血中circRNA的特性，选择外周血单个核细胞(Peripheralbloodmononuclearcell，PBMC)中的circRNA标记物用于活动性肺结核无创诊断，以保证诊断的稳定性、准确性、和敏感性。

本发明为了实现上述目的所采取的技术方案是：

用于活动性肺结核无创诊断的外周血环状RNA标记物，其特征在于：所述环状RNA标记物包括7个环状RNA：hsa_circ_0000681，hsa_circ_0008797，hsa_circ_0002113，hsa_circ_0002362，hsa_circ_0000414，hsa_circ_0063179和hsa_circ_0002908。

上述用于活动性肺结核无创诊断的外周血环状RNA标记物在制备活动性肺结核诊断试剂盒中的应用。

用于活动性肺结核无创诊断的外周血环状RNA标记物的引物，其特征在于：所述引物如序列表SEQ IDNO.8-SEQ IDNO.21所示。

上述用于活动性肺结核无创诊断的外周血环状RNA标记物的引物在制备活动性肺结核诊断试剂盒中的应用。

一种活动性肺结核诊断试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求3所述的用于活动性肺结核无创诊断的外周血环状RNA标记物的引物。