[发明专利]一种副鸡禽杆菌的抗原蛋白及其应用

说明书

本发明公开了一种副鸡禽杆菌的抗原蛋白及其应用，所述抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。还提供了一种用于检测副鸡禽杆菌抗体的试剂盒。该试剂盒可用于检测或辅助检测副鸡禽杆菌A型菌、B型菌和C型菌体的外膜蛋白诱导的抗体。通过检测结果判断鸡的免疫状态，以便于养鸡业者采取相应的措施。所述试剂盒中含有阴性对照血清、阳性对照血清，保证检测结果准确、可靠。本发明还提供了一种副鸡禽杆菌的疫苗制剂，用于接种鸡，可有效保护鸡抵御A型、B型、C型副鸡禽杆菌的感染。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种副鸡禽杆菌的抗原蛋白及其应用。

背景技术

副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum，Apg)是细小的革兰氏阴性菌，细菌长约1-3μm，宽0.4-0.8μm，无鞭毛，不形成芽孢，毒力菌株往往有荚膜。副鸡禽杆菌培养条件较为苛刻，需要在培养基中加入NAD，但在南非发现NAD非依赖性分离株，说明NAD不是必需的营养成分。该菌兼性厌氧，在固体培养基上培养时，需厌氧环境或3％-10％的CO₂。

副鸡禽杆菌是鸡传染性鼻炎(infectious coryza，IC)的致病菌，引起鸡的一种呼吸道传染病。引起鸡打喷嚏、流出稀薄水样鼻涕，鼻液逐渐粘稠并带有难闻的臭味，干燥后在鼻孔周围凝固成黄色结痂，影响呼吸，之后出现眼结膜和面部肿胀，甚至上下眼皮粘合在一起，消瘦，下痢，使产蛋鸡产蛋量下降，其经济损失较大。

Page等人通过血凝抑制(HI)方法将Apg分类为A、B和C型三种型，并且发现三种血清型之间没有交叉保护。1987年冯文达首先在北京分离得到A型副鸡禽杆菌，林毅在一个发病鸡场分离得到C型副鸡禽杆菌。之后国内陆续有B型副鸡禽杆菌的报道。并且发现A型和C型副鸡禽杆菌均为致病菌株，但同型的不同菌株之间存在差异，而B型副鸡禽杆菌的部分分离菌株也有很强的致病性。

疫苗免疫是预防和控制鸡传染性鼻炎发生的最有效的途径，而免疫后抗体水平的高低反映实际的疫苗免疫效果，直接关系到免疫鸡群对副鸡禽杆菌的抵抗力。关于鸡传染性鼻炎疾病的预防，以往广泛使用的是将Apg的菌体用福尔马林或硫柳汞等灭活方法得到的疫苗，但是这种方法也有一定的缺陷，在给与这些疫苗时，存在趴窝等一过性强烈的毒副作用。养殖户强烈期望能够开发一种安全性高的疫苗。在这种情况下，人们希望开发毒性成分较少的亚单位疫苗。

感染了Apg的鸡发病急、病程短，发病后不能快速诱导产生抗体。鸡传染性鼻炎的血清学诊断意义不大。但对于全菌灭活疫苗免疫后的鸡，能够诱导产生针对Apg菌体红细胞凝集素(Hemagglutinin，以下称为“HA”)的抗体，因此，在实践中常用抗HA抗体的红细胞凝集抑制试验(以下也称为“HI试验”)评价疫苗免疫效果。HI试验涉及到新鲜鸡红细胞或戊二醛固定的鸡红细胞。该方法具有以下几个方面的不足之处：1.在评价Apg A型菌的疫苗效果时必须采用新鲜的鸡红细胞，因此需要常年饲养试验鸡，且确保供血用鸡健康；采血和血液处理等过程费时费力；2.鸡红细胞批次间差异影响试验结果，3.该方法最终依靠测定者主观判定抗体的效价，难以获得稳定的标准。

Sun等人报道了利用型特异性单克隆抗体的竞争ELISA，以此代替HI试验的血清学诊断法。竞争ELISA是将菌体超声破碎所得的破碎物作为抗原，使用与各血清型反应的单克隆抗体竞争性检测血清中的抗体的ELISA法。本方法灵敏度高，具有一次处理多个样本的优点。但是，采用该方法需要确保型特异性单克隆抗体、血清样本中的抗体都可以和同一个表位结合，由于菌体的变异而失去该表位时，则无法检测菌体感染或疫苗接种所产生的抗体，该方法易出现假阴性结果。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种副鸡禽杆菌的抗原蛋白，当用于疫苗抗原时，以该成分制备的亚单位疫苗免疫后的鸡，能够诱导产生针对性的抗体，有效提高了免疫鸡群对副鸡禽杆菌的抵抗力。