[发明专利]一种肝螺杆菌LAMP快速检测方法

说明书

本发明提供一种肝螺杆菌LAMP的检测引物组，包括两条外引物、两条内引物和一条环引物，所述引物具有SEQ ID NO.1～NO 5的核苷酸序列。本发明还提供了肝螺杆菌LAMP的PCR检测体系，包括以下组分：引物组：两条外引物、两条内引物和一条环引物；2×反应缓冲液、DNA聚合酶、荧光染料、DNA模板与灭菌纯净水。本发明公开一种特异性检测肝螺杆菌的LAMP引物及扩增方法，不受培养条件的限制，具备操作简单，特异性好，灵敏度高，结果易于观察，对仪器设备要求低等优点，可用于肝螺杆菌的快速检测，适宜推广应用。

技术领域

本发明属于生化检测领域，具体涉及一种肝螺杆菌LAMP快速检测方法。

背景技术

肝螺杆菌(Helicobacterhepaticus)是一种重要的人兽共患病病原，可引起慢性活动性肝炎、肝癌、乳腺癌、盲肠炎、结肠炎等多种疾病；肝螺杆菌为微需氧菌，营养要求高，生化鉴定试验操作繁琐，耗时费力，通常需2-3周才能获得检测结果，且灵敏度非常低。通常造成漏检，因此培养法不适于快速检测。血清学方法操作简便，可在同一时间内检测大量样品，但由于不同螺杆菌之间交叉反应的存在，导致假阳性的可能，使得肝螺杆菌种特异性鉴别难以进行。PCR方法具备快速、特异、灵敏的优势，已被广泛应用，但检测过程需要昂贵的扩增仪等设备支持且易发生污染导致假阳性等问题，限制了该方法在一线现场的推广应用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种肝螺杆菌LAMP的检测引物组，包括两条外引物、两条内引物和一条环引物，所述引物具有如下核苷酸序列：F3正向外引物：5’-GCAGCTTTAACATTAACTTGTGTA-3’(SEQ ID NO.1)；B3反向外引物：5’-AATGCGAATGTCGCTCAA-3’(SEQ ID NO.2)；

FIP正向内引物：

5’-GCCCAGCTTGATAAACTCCGTATAGTTGAAACAAGTTGAATCTGTG-3’(SEQ ID NO.3)；

BIP反向内引物：

5’-TCTGCCATATCCATAACTACCATTGATCTCCATTTTGATGGTATCG-3’；(SEQ ID NO.4)

LB反向环引物：5’-CCTTTAAGGCTTGTAACCCCA-3’(SEQ ID NO.5)。

优选地，本发明所述的肝螺杆菌LAMP的PCR检测体系中，包括以下组分：引物组：两条外引物、两条内引物和一条环引物；2×反应缓冲液、DNA聚合酶、荧光染料、DNA模板与灭菌纯净水。

优选地，本发明所述的肝螺杆菌LAMP的PCR检测体系中，所述引物具有如下核苷酸序列：

F3正向外引物：5’-GCAGCTTTAACATTAACTTGTGTA-3’(SEQ ID NO.1)；B3反向外引物：5’-AATGCGAATGTCGCTCAA-3’(SEQ ID NO.2)；

FIP正向内引物：

5’-GCCCAGCTTGATAAACTCCGTATAGTTGAAACAAGTTGAATCTGTG-3’(SEQ ID NO.3)；

BIP反向内引物：

5’-TCTGCCATATCCATAACTACCATTGATCTCCATTTTGATGGTATCG-3’；(SEQ ID NO.4)。

优选地，本发明所述的肝螺杆菌LAMP的PCR检测体系中，所述PCR检测体系包括：以25μL LAMP的PCR反应体系计，5pM的外引物F3和B3各1μL；40pM的内引物FIP和BIP各1μL；20pM的反向环引物LB 1μL；2×反应缓冲液12.5μL；Bst DNA聚合酶1μL；荧光染料1μL；DNA模板2μL，不足部分用灭菌纯净水补足。