[发明专利]一种鲫鱼冠状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物及应用

说明书

本发明属于病毒检测领域，具体公开了一种鲫鱼冠状病毒TaqMan实时荧光定量RT‑PCR检测引物和探针及应用，发明人首次从鲫鱼中分离出了一种鲫鱼冠状病毒，该病毒为鲫鱼冠状病毒（Crucian Carp Bafinivirus）HB93，针对该病毒序列设计引物和探针：正向引物F：5'‑ATCAAACACCCACTCCCAC‑3'，反向引物R：5'‑AGGTCAGGTGATGTTGCG‑3'；荧光探针为P：5'‑FAM‑TGACCCATTCTTGCACTGCTTCTGT‑TAMRA‑3'。可对鲫鱼冠状病毒进行定量检测，该引物的特异性好，灵敏度高。

技术领域

本发明属于病毒分子检测技术领域，具体涉及一种鲫鱼冠状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物及应用。

技术背景

国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)于2012年发表了最新的病毒分类第九次报告，将套式病毒目(Nidovirales)中的冠状病毒科(Coronavi ridea)中新设冠状病毒亚科(Coronavirinea)和环曲病毒亚科(Torovirinae)。

冠状病毒科是一类线形单股正链RNA病毒，最早于1937年从鸡身上分离出来，Almeida等对这些病毒进行了形态学研究，电子显微镜观察发现这些病毒的包膜上有形似日冕的棘突，故提出命名这类病毒为冠状病毒[1]。1975年，国际病毒命名和分类委员会正式命名了冠状病毒科。2002-2003年期间，自我国局部地区发生的非典型肺炎，即由冠状病毒属的严重急性呼吸综合征病毒(SARS-CoV)引起，世界上有30多个国家和地区相继报道出现病例，病死率超过10％。2012年，中东地区开始出现新型冠状病毒，病死率超过50％，引起了世界范围的广泛关注，造成社会对冠状病毒的恐慌。因此，对冠状病毒进行深入研究具有重要意义。

目前对冠状病毒科的研究主要集中在冠状病毒亚科，而对环曲病毒亚科研究甚少。其中，2006年鳊鱼病毒属(Bafinivirus)的中的鳊鱼病毒(White bream virus)由Schütze H等科学家在鳊鱼体内发现，这也是目前ICTV分类中确定的唯一以水生动物为宿主的冠状病毒。

目前鲫鱼冠状病毒(Crucian Carp Bafinivirus,CCBV)尚无公开报道，更也无有效的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鲫鱼冠状病毒HB93TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物，所述的引物如下：

正向引物F：5'-ATCAAACACCCACTCCCAC-3'，反向引物R：5'-AGGTCAGGTGATG TTGCG-3'；荧光探针P：5'-FAM-TGACCCATTCTTGCACTGCTTCTGT-TAMRA-3'。

本发明的目的在于提供一种鲫鱼冠状病毒HB93TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物的应用，包括利用所述的应用制备成鲫鱼冠状病毒检测试剂盒。

本发明的最后一个目的在于提供了一种鲫鱼冠状病毒HB93TaqMan实时荧光定量RT-PCR的阳性对照，所述的阳性对照是将SEQ ID NO.2所示序列插入pGEM-T载体中获得。为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种鲫鱼冠状病毒HB93TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物，所述的引物如下：正向引物F：5'-ATCAAACACCCACTCCCAC-3'，反向引物R：5'-AGGTCAGGTGATGTTG CG-3'；荧光探针P：5'-FAM-TGACCCATTCTTGCACTGCTTCTGT-TAMRA-3'。

一种鲫鱼冠状病毒HB93TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物的应用，包括利用上述引物制备成用于检测鲫鱼冠状病毒检测试剂盒，或直接用于鲫鱼冠状病毒的检测。