[发明专利]白及微块茎的组培快繁方法

说明书

本发明涉及白及微块茎的组培快繁方法，包括以下步骤：(1)白及果实的选择、(2)无菌播种、(3)种胚萌发培养、(4)芽分化培养、(5)生根与微块茎诱导培养。本发明提供的白及微块茎的组培快繁方法，在不同生长阶段给予不同光照强度与培养温度，促进白及种胚高效萌发，及其萌发后及时分化叶原基形成芽体，生根与块茎形成在同一培养基中诱导完成，实现种子萌发与叶芽分化、生根成苗与微块茎诱导同步完成，诱导率高，种苗质量高和移栽成活率高，实现白及种苗的优质生产，能有效保护和抢救野生资源，还能满足规模化生产的需求。

技术领域

本发明涉及白及组织培养方法，尤其涉及白及微块茎的组培快繁方法。

背景技术

白及Bletilla striat为兰科白及属(Bletilla Rchb.f.)植物，为多年生宿根草本，地下部假鳞茎块根状，又称良姜、紫兰、甘根、连及草，为我国传统中药材，1977年以后各版《中国药典》均有收载。其味苦、甘、涩；性微寒，归肺、肝、胃经，具有收敛止血,消肿生肌的功能。主要用于治疗咳血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂、肺结核咳血、溃疡病出血等。现代研究发现块根含有近5O种化合物，在医药、化工、食品等方面的应用前景十分广阔，综合利用潜力很大。近年来野生资源遭到了无限制采挖，加上生态环境的破坏，野生资源量急剧减少，价格也逐年攀升，已被我国列为珍稀濒危保护植物，同时也被列入《濒危动植物种国际贸易公约》(CITES)的附录Ⅱ中，受到国际保护。因此需要引导和开展人工栽培满足市场需求及保护野生白及资源。长期以来，白及种植常常以分割块茎的方式进行繁殖种苗，不仅繁殖系数低、周期长、耗种量大，且易导致病毒累积，种苗成本居高不下。白及种子非常细小且无胚乳，自然条件下萌发率极低，而种子非共生培养则能获得萌发，已有白及种子无菌播种繁育种苗的研究报道和公开的专利，有的采用“种子萌发原球茎→原球茎增殖→分化芽→生根培养”的组织培养途径，有的采用“种子萌发原球茎→分化芽→诱导芽增殖丛生芽→生根培养”的途径，也有“种子萌发原球茎→分化芽→生根培养”的培养途径。以上组培育苗途径和培养方法极易分化出丛生苗，苗体纤细瘦弱，生长缓慢，很难形成微块茎，种苗生产存在培养周期长、种苗易老化、质量参差不齐、移栽成活率较低、或者增殖率低、种植后块茎产量低等诸多问题，尚未能实现种苗工业化生产。

发明内容

本发明为了克服现有技术存在的问题，提供白及微块茎的组培快繁方法，该方法在种胚萌发培养和芽分化培养阶段诱导种子高效萌发并快速分化出叶，在生根与微块茎诱导培养阶段促使微块茎形成与根分化同步进行，实现了使种子萌发率提高、快速繁育形成微块茎，缩短白及组培育苗周期，提高田间种植块茎药材的产量，克服试管苗易老化、移栽成活率低、块茎药材产量低等目的。该项技术操作简便，生产周期短，节省成本，成苗率高，实用性强，为白及种业的产业化提供新方法。

本发明通过以下技术方案实现：

白及微块茎的组培快繁方法，包括以下步骤：

(1)白及果实的选择：选择外表颜色为黄绿色、黄色或褐色且饱满、未开裂的蒴果用于组织培养；

(2)无菌播种：将步骤(1)中选取的果实用质量百分比浓度为70-85％的酒精浸泡45秒以上，然后置于质量百分比浓度为0.12-0.25％的升汞溶液中消毒8-15分钟，之后用无菌水冲洗3-5次后，切开果皮，将黄白色或黄色或褐色的粉状种子均匀撒播在种胚萌发培养基表面；

(3)种胚萌发培养：将上述撒播了种子后的种胚萌发培养基置于温度为15-25℃且无光照条件下培养诱导种胚萌发；

(4)芽分化培养：在上述步骤(3)种胚萌发培养7-20天的时候，观察种胚，当种胚陆续膨大、萌发形成白色或乳黄色的尚未突破种皮的近球状体时，转入以下条件进行光照培养：光照强度为2000-2500lx，光照时间8-10小时/天，培养温度15-25℃；光照培养10-20天，当种胚由白色转为绿色，近球状体顶端分生组织陆续分化出子叶、子叶分化发育形成具2-3片叶的芽体，且95％以上的球状体发育形成芽体时转入下一阶段培养；